6 گام در توالی یابی سنگر| Sanger Sequencing Service
Sanger Sequencing
تعیین توالی به روش سنگر، که به عنوان “روش خاتمه زنجیره” نیز شناخته می شود، توسط بیوشیمی دان انگلیسی فردریک سنگر و همکارانش در سال 1977 توسعه یافت. این روش برای تعیین توالی نوکلئوتیدی در یک قطعه DNA (معمولاً کمتر از 1000 جفت باز در طول) در نظر گرفته می شود.
در صورتی که به خدمات توالی یابی سنگر (توالی یابی dna) نیازمند هستید بروی دکمه زیر کلیک کنید.
ورود به صفحه ثبت درخواست توالی یابی سنگر
علاوه بر توالی یابی به روش سنگر توسعه فناوری های NGS (توالی یابی ایلومینا)تحقیقات ژنومی را تسریع کرده است. NGS می تواند همزمان بیش از 100 ژن (توالي يابي ژني) و کل ژنوم با DNA را توالی کند. توالی یابی سنگر به طور گستردهای در زمینه توالی یابی استفاده می شود زیرا چندین مزیت دارد:
(1) مقرون به صرفه بودن برای تعیین توالی ژنها
(2) دقت 99.99%، به ویژه برای بررسی توالی یابی جهش زایی با استفاده از سایت یا درجهای کلون شده.
مراحل توالی یابی سنگر Sanger Sequencing:
در توالی یابی سنگر، از آغازگر DNA مکمل الگوی DNA (DNA ای که باید توالی یابی شود) به عنوان نقطه شروع سنتز DNA استفاده شود. در حضور چهار تری فسفات دئوکسی نوکلئوتیدی (dNTPs: A ، G ، C و T) ، پلیمراز با افزودن dNTP مکمل به رشته DNA الگو، آغازگر را گسترش می دهد.
برای تعیین اینکه کدام نوکلئوتید در زنجیره نوکلئوتیدها گنجانده شده است، چهار تری فسفات دئودوکسی نوکلئوتیدی (ddNTPs: ddATP ، ddGTP ، ddCTP و ddTTP) که دارای رنگ فلورسنت مجزا هستند، برای خاتمه واکنش سنتز استفاده میشود.
در مقایسه با dNTPها، ddNTPs دارای اتم اکسیژن از ریبونوکلئوتید است، بنابراین نمی تواند با نوکلئوتید بعدی پیوند ایجاد کند. پس از سنتز، محصولات واکنش بسته به نوکلئوتیدهای متنوع خاتمه دهنده زنجیره در چهار مسیر یک ژل بارگذاری می شوند و تحت الکتروفورز ژل قرار می گیرند. با توجه به اندازه آن ها ، توالی DNA به این ترتیب تعیین می شود.
به طور کلی روش تعیین توالی dna به روش سنگر شامل 6 مرحله است:
(1) DNA دو رشته ای (dsDNA) تبدیل به دو DNA تک رشته ای (ssDNA) می شود.
(2) یک آغازگر که مربوط به یک سر دنباله، متصل می شود.
(3) چهار محلول پلیمراز با چهار نوع dNTP اما تنها یک نوع ddNTP اضافه می شود.
(4) واکنش سنتز DNA آغاز می شود و زنجیره گسترش می یابد تا زمانی که یک نوکلئوتید خاتمه به طور تصادفی ترکیب شود.
(5) قطعات DNA حاصله تبدیل به ssDNA می شوند.
(6) قطعات دناتوره شده توسط الکتروفورز ژل جدا شده و توالی تعیین می شود.
الکتروفورز روشی است که قطعات DNA را با طول های مختلف جدا می کند. قطعات DNA را به پایه ژل اضافه کرده و آن را در معرض جریان الکتریکی قرار گرفته، این باعث می شود که قطعات با توجه به اندازه آنها از طریق ژل عبور کنند. کوچکترین قطعات می توانند دورترین را حرکت دهند و بزرگترین قطعات اصلا دور نمی شوند.
پس از اتمام حرکت قطعات، ژل تحت اشعه ایکس یا اشعه ماوراء بنفش قرار می گیرند. این به دانشمندان اجازه می دهد تا هر بخش را ببینند.
برای خواندن ژل ، به نوارهای تیره در هر ستون نگاه می کنید. برای هر نوع نوکلئوتید یک ستون وجود دارد (G ، C ، A ، T). با خواندن توالی نوارها ، می توانید توالی نوکلئوتیدها را تعیین کنید.
روش توالی یابی سنگر به دانشمندان اجازه می دهد تا DNA بسیاری از موجودات را از باکتری گرفته تا انسان تعیین کنند. با استفاده از فلورسنت ها و رایانه ها میتوان DNA فرد (همه 3 میلیارد پایگاه) را در چند روز تعیین کرد.
جهت توالی یابی سنگر در شرکت کیاژن به نکات زیر توجه کنید
۱.ابتدا در سایت ثبت نام و اطلاعات کاربری را کامل کنید.
تکمیل اطلاعات کاربری یکبار برای همیشه صورت میپذیرد و از اطلاعات مذکور جهت ثبت فاکتور و پیش فاکتور و ورود شما به سایت جهت دفعات بعد استفاده می شود.
۲.بعد از ثبت نام در سایت به جهت ثبت نمونه های سنگر در سایت کیاژن -> منوی خدمات ->تولی یابی سنگر را انتخاب کرده و به لینک زیر وارد شوید.
ورود به صفحه ثبت درخواست توالی یابی سنگر – پرداخت هزینه – دریافت لینک دیتا
۳.پس از ثبت مجازی نمونه ها هزینه توسط کارشناسان کیاژن برآورد شده و به شما جهت پرداخت اطلاع رسانی خواهد شد جهت پرداخت به لینک مرحله ۲ مراجعه کنید.
(درصورت اورژانسی بودن ارسال نمونه پس از ثبت نمونه با کارشناسان کیاژن ۰۲۱۹۱۰۱۰۸۰۹ تماس بگیرید و مراتب را اطلاع دهید.)
۴.جهت آماده سازی نمونه به توضیحات پایین تر همین صفحه مراجعه کنید.
۵.دیتای توالی انجام شده پس از دو هفته از طریق لینک مرحله ۲ قابل دسترسی است به همچنین یک ایمیل حاوی دیتا به ایمیل ثبت شده در کاربری شما ارسال خواهد شد.
۶.فاکتور به نشانی شما با دریافت هزینه پست یا پیک ارسال می شود.
خدمات عالی و ارزشمند