دستورالعمل و پروتکل تهیه محلول رنگ آمیزی آکریدین اورنج | Acridine Orange Staining Solution (1 µM) recipe protocol

دستورالعمل و پروتکل تهیه محلول رنگ آمیزی آکریدین اورنج | Acridine Orange Staining Solution (1 µM) recipe protocol

Acridine Orange Staining Solution is a type of fluorescent dye used in biological research and medical diagnostics. It is particularly useful in the field of cytology, the study of cells. Acridine Orange can insert itself between the base pairs in the DNA or RNA structures. This property makes it a valuable tool for staining and visualizing nucleic acids in cells.

When Acridine Orange binds to DNA, it fluoresces green under ultraviolet light, while when it binds to RNA, it fluoresces red. This differential staining allows researchers to distinguish between DNA and RNA in a sample, which can be useful in a variety of applications. For instance, it can be used to identify cell death (apoptosis), as dying cells often show an increase in RNA content. It’s also used in cancer research to identify malignant cells, which often have different RNA/DNA ratios than healthy cells.

Also acridine Orange is used to stain acidic vesicular organelles (AVOs), which are a characteristic feature of autophagic cells. When Acridine Orange is added to cells, it can move across biological membranes and accumulate in acidic compartments, such as AVOs. In these acidic environments, the dye forms aggregates that emit bright red fluorescence.

1. Prepare a stock solution of 1 mM acridine orange (Invitrogen A1301) in molecular-grade H₂O. Cover with aluminum foil to minimize light exposure. Store at room temperature.

• 2. Immediately before use, dilute the stock solution with spring water to prepare a staining solution of 1 µM acridine orange.

محلول رنگ آمیزی آکریدین اورنج نوعی رنگ فلورسنت است که در تحقیقات بیولوژیکی و تشخیص پزشکی استفاده می شود. این به ویژه در زمینه سیتولوژی، مطالعه سلول ها مفید است. آکریدین اورنج می تواند خود را بین جفت های باز در ساختارهای DNA یا RNA قرار دهد. این ویژگی آن را به ابزاری ارزشمند برای رنگ آمیزی و تجسم اسیدهای نوکلئیک در سلول ها تبدیل می کند.
هنگامی که آکریدین اورنج به DNA متصل می شود، زیر نور ماوراء بنفش به رنگ سبز فلورسانس می شود، در حالی که وقتی به RNA متصل می شود، فلورسانس قرمز می شود. این رنگ‌آمیزی افتراقی به محققان اجازه می‌دهد بین DNA و RNA در یک نمونه تمایز قائل شوند که می‌تواند در کاربردهای مختلف مفید باشد. به عنوان مثال، می توان از آن برای شناسایی مرگ سلولی (آپوپتوز) استفاده کرد، زیرا سلول های در حال مرگ اغلب افزایش محتوای RNA را نشان می دهند. همچنین در تحقیقات سرطان برای شناسایی سلول‌های بدخیم که اغلب نسبت‌های RNA/DNA متفاوتی نسبت به سلول‌های سالم دارند، استفاده می‌شود.

همچنین از آکریدین اورنج برای رنگ آمیزی اندامک های تاولی اسیدی (AVOs) استفاده می شود که از ویژگی های مشخصه سلول های اتوفاژیک هستند. هنگامی که آکریدین نارنجی به سلول ها اضافه می شود، می تواند در غشاهای بیولوژیکی حرکت کند و در محفظه های اسیدی مانند AVO انباشته شود. در این محیط‌های اسیدی، رنگ دانه‌هایی تشکیل می‌دهد که فلورسانس قرمز روشن منتشر می‌کنند.

1. محلول ذخیره ای از 1 میلی مولار آکریدین اورنج (Invitrogen A1301) در H2O با گرید مولکولی تهیه کنید. برای به حداقل رساندن قرار گرفتن در معرض نور با فویل آلومینیومی بپوشانید. در دمای اتاق نگهداری شود.

2. بلافاصله قبل از استفاده، محلول موجود را با آب مقطر رقیق کنید تا محلول رنگ آمیزی از 1 میکرومولار آکریدین اورنج تهیه شود.