مخلوط aa-dNTP/Cy-dNTP به مخلوطی از دو نوع نوکلئوتید اصلاح‌شده اشاره می‌کند “aa-dNTP” و “Cy-dNTP”.
- نوکلئوتیدهای aa-dNTP
نوکلئوتیدهای aa-dNTP نوکلئوتیدهای اصلاح‌شده‌ای هستند که یک گروه آمینوآلیل به قند دی‌اکسی ریبوز متصل می‌شود. گروه آمینوآلیل امکان اتصال آسان به برچسب‌های شیمیایی مختلف یا رنگ‌ها را فراهم می‌کند. این نوکلئوتیدها معمولاً در تکنیک برچسب‌گذاری غیر مستقیم DNA و RNA با مواد فلوروفور و دیگر برچسب‌های شیمیایی برای شناسایی، مطالعات هیبریدی و آزمایشات میکرو آرایه استفاه می‌شئند.
در این روش، محققان نوکلئوتید) aa-dUTPیک نوع aa-dNTP با باز تریمیدین) را در فرآیندهای تکثیر مثل PCR یا ترانسکریپشن معکوس وارد DNA می‌کنند. سپس DNA با برچسب آمینوآلیل‌شده به واکنش شیمیایی با رنگ‌های فلورسنتی تقرار می‌گیرد که به‌طور خاص به گروه آمینوآلیل متصل می‌شوند. نتیجه این عمل برچسب‌گذاری‌شده DNA است که می‌تواند در کاربردهای مختلفی مانند آزمایش‌های میکروآرایه، هیبریدیزاسیون فلورسنتی در محل (FISH) و سایر آزمایش‌های مبتنی بر هیبریدیزاسیون مورد استفاده قرار گیرد.
روش برچسب‌گذاری غیرمستقیم aa-dUTP به دلیل این‌که امکان انتخاب گسترده‌ای از رنگ‌های فلورسنتی را فراهم می‌کند و نسبتاً ساده انجام می‌شود، بسیار ارزشمند است.
- نوکلئوتیدهای Cy-dNTP
نوکلئوتیدهای Cy-dNTP نوکلئوتیدهای اصلاح‌شده هستند که مولکول‌های رنگی سیانین را در فرآیند تکثیر یا تقویت DNAقرار می‌گیرند. این نوکلئوتیدها معمولاً در real-time PCR، توالی یابی DNA و تکنیک‌های دیگر زیست‌شناسی مولکولی که نیاز به برچسب‌گذاری فلورسنتی دارند، مورد استفاده قرار می‌گیرند.
هر مولکول رنگی سیانین دارای ویژگی‌های خاص فلورسنسی، از جمله طول موج برانگیختگی و انتشار را دارد که می‌تواند برای نیازهای خاص آزمایشی استفاده شود . استفاده از Cy-dNTPها امکان نظارت به صورت زمان‌واقعی بر فرآیندهای تقویت DNA یا هیبریدیزاسیون را فراهم می‌کند که به محققان اجازه می‌دهد پیشرفت و تعداد چرخه‌های تکثیر را به‌صورت زمان‌واقعی تعیین کنند.
نوکلئوتیدهای Cy-dNTP به‌ویژه در آزمایش‌های PCR کمیتی (qPCR) ارزشمند هستند که میزان DNA در هر چرخه تکثیر اندازه‌گیری می‌شود
به‌طور خلاصه، مخلوط aa-dNTP/Cy-dNTP شامل ترکیبی از نوکلئوتیدهای aminoallyl-dNTP و cyanine-dNTP می‌شود. این نوکلئوتیدهای اصلاح‌شده برای معرفی گروه‌های عملکردی خاص یا رنگ‌های فلورسنتی به DNA در فرآیندهای تقویت یا سنتز استفاده می‌شوند. آنها نقش حیاتی در تکنیک‌های مختلف زیست‌شناسی مولکولی را ایفا می‌کنند و به محققان امکان برچسب‌گذاری، تشخیص و اندازه‌گیری DNA یا RNA را در تنظیمات آزمایشی مختلف فراهم می‌کنند. چنین نوکلئوتیدهای اصلاح‌شده به‌دلیل انعطاف‌پذیری بالا و استفاده آسان، ابزارهای ارزشمندی در پژوهش‌های زیست‌شناسی مولکولی مدرن محسوب می‌شوند.
| غلظت نهایی | مواد معرف واکنش |
|---|---|
| 25mM | dATP |
| 25mM | dCTP |
| 25mM | dGTP |
| 10mM | dTTP |
| 15mM | Aminoallyl-dUTP or CyX-dUTP |
نسبت aa-dUTP به dTTP را می توان تغییر داد یا بهینه کرد.
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
