بافر NaOAc و EDTA می‌تواند برای انواع مختلفی از کاربردها در زمینه بیوشیمی و بیولوژی مولکولی مورد استفاده قرار گیرد، در ادامه جزئیاتی درباره کاربردهای بافر NaOAc و EDTA آورده شده است:
۱.استخراج DNA و RNA :این بافر می‌تواند برای لیز سلول‌ها به منظور آزادسازی DNA یا RNA استفاده شود. استفاده از سدیم استات به شکلی کمک می‌کند که غشای سلولی را مختل کند و EDTA نیز با فلزاتی که ممکن است اسید های نوکلئیک را تخریب کنند، کمپلکس می‌شود. این بافر همچنین می‌تواند برای رسوب دادن DNA یا RNA با افزودن اتانول یا ایزوپروپانول استفاده شود.
۲.پالایش پروتئین: این بافر می‌تواند به عنوان بافر شستشو و بافر رهاساز در کروماتوگرافی تمایلی برای خالص‌سازی پروتئین‌ها استفاده شود. سدیم استات به حفظ pH بافر کمک می‌کند، در حالی که EDTA با فلزاتی که ممکن است با پروتئین‌ها ترکیب شوند، کمپلکس می‌شود. بافر همچنین می‌تواند به عنوان بافر دیالیز برای حذف مولکول‌های کوچک غیر مورد نظر از پروتئین‌های تصفیه شده استفاده شود.
۳.سنجش فعالیت آنزیم: این بافر می‌تواند برای حفظ pH پایدار و جلوگیری از فلزاتی که ممکن است با فعالیت آنزیم تداخل کنند، استفاده شود. pH بافر می‌تواند به pH بهینه آنزیم مورد نظر تنظیم شود و EDTA می‌تواند برای کمپلکس شدن با فلزاتی که ممکن است آنزیم را مهار یا فعال کنند، استفاده شود.
۴.الکتروفورز ژل: این بافر می‌تواند به عنوان بافر نگهدارنده برای الکتروفورز ژل آگارز یا پلی
آکریل آمید برای DNA یا RNA استفاده شود.
۵.ایمونوهیستوشیمی: این بافر می‌تواند به عنوان بافر مسدود کننده یا محلول پایین آنتی بادی در پروتکل‌های ایمونوهیستوشیمی استفاده شود. بافر به حفظ pH پایدار کمک می‌کند و EDTA می‌تواند برای کمپلکس شدن با فلزاتی که ممکن است با اتصال آنتی‌به آنتی‌ژن-آنتی‌بادی تداخل کنند، استفاده شود.
به طور کلی، بافر NaOAc و EDTA یک بافر چند منظوره است که در بسیاری از برنامه‌های شیمیایی و بیوشیمیایی مورد استفاده قرار می‌گیرد. قابلیت حفظ pH پایدار و کمپلکس شدن با فلزات آن را برای بسیاری از آزمایش‌های مختلف مفید می‌کند.
طبق بررسی انجام شده، بافر NaOAc و EDTA یک ابزار چندمنظوره است که در بسیاری از آزمایش‌های بیوشیمی و بیولوژی مولکولی کاربرد دارد. قابلیت حفظ pH پایدار و شلاته شدن یون‌های فلزی آن، باعث می‌شود که این بافر برای تجزیه و جداسازی اسید نوکلئیک، تصفیه پروتئین، تکنیک‌های مولکولی و بسیاری از آزمایش‌های بیوشیمیایی کاربرد داشته باشد.
مقدار مواد شیمیایی برای ۱۰۰ میلی‌لیتر غلظت نهایی
این دستورالعمل برای تهیه محلول بافری حاویNaOAc و اسید اتیلن‌دی‌آمین‌تترا استیک (EDTA) با غلظت نهایی به ترتیب ۵۰ میلی‌مولار و ۱ میلی‌مولار است.
برای تهیه این محلول بافر، شما به موارد زیر نیاز دارید:
– ۵ میلی‌لیتر از استات سدیم ۱ مولار (pH ۴.۵)
– ۰.۲ میلی‌لیتر از EDTA ۰.۵ مولار (pH ۸.۰)
– ۹۴.۸ میلی‌لیتر آب
برای تهیه محلول بافر، به مراحل زیر عمل کنید:
۱. در صورتی که pH محلول استات سدیم به ۴.۵ نرسیده است، آن را تنظیم کنید.
۲. ۰.۲ میلی‌لیتر محلول EDTA را به محلول استات سدیم اضافه کنید.
۳. مقدار کافی آب را اضافه کنید تا حجم کل محلول به ۱۰۰ میلی‌لیتر برسد.
۴. در صورت لزوم، با استفاده از pH متر یا نوارهای نشانگر pH، pH محلول را به ۴.۵ تنظیم کنید.
پس از تهیه محلول بافر، می‌توان آن را در دمای اتاق برای چند ماه نگهداری کرد. فقط مطمئن شوید که محلول را با نام بافر، غلظت، pH و تاریخ تهیه برچسب‌گذاری کنید.
| غلظت نهایی | مقدار لازم برای 100 میلی لیتر | مواد تشکیل دهنده |
|---|---|---|
| 50mM | 5mL | NaOAc (1 M, pH 4.5) |
| 1mM | 0.2mL | EDTA (0.5 M, pH 8.0) |
| – | 94.8mL | H2O |
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
