Taq DNA Polymerase kit | کیت تگ دی ان ای پلیمراز

Taq DNA Polymerase

Cat. No:

FPLF001.0250

FPLF001.0500

Contents:

Kit storage:

This kit should be stored at -20 ^oC. Under this condition reagents are stable for two years from the date of production.

Description:

Taq DNA Polymerase is a high quality purified recombinant enzyme and catalyze 5’→3′ synthesis of DNA. The enzyme has no detectable 3’→5′ proofreading exonuclease activity. It is provided with 10X reaction buffer that will enable or improve sub-optimal PCR caused by templates that have a high degree of secondary structure or that are GC-rich.

Protocol:

1-Thaw 10X reaction buffer, dNTP mixture.

2-Mix the master mix thoroughly and dispense appropriate volumes into PCR tubes or plates.

3-Add templates DNA to the individual PCR tubes or wells containing the master mix.

4-Program the PCR machine according to the program outlined.

Note:

* Extension temperature is between 68 and 72°C.
We highly recommend 68 °C for more efficiency of Taq DNA polymerase.

* For PCR products longer than 3~4 Kb, use an extension time of approximately 1 min per Kb DNA.

* A DNA fragment which is amplified by Taq DNA polymerase has A overhang, and it enables you to do cloning by using T-vector.

Agarose gel Electrophoresis:

Run the total 5-7 μL of PCR products alongside 3μL DNA marker on a 2% agarose gel containing DNA safe stain.

Disclaimers and Addresses:

This product is for Research use only and should only be used by trained professionals.

————————————————————————————————————

Taq DNA polymerase is a commonly used enzyme in the polymerase chain reaction (PCR) to amplify DNA sequences. It is a thermostable DNA polymerase derived from the bacterium Thermus aquaticus, which is capable of withstanding high temperatures and remaining active, unlike most other DNA polymerases that would become denatured at high temperatures.

Taq DNA polymerase is used in PCR for various applications, such as gene cloning, DNA sequencing, and diagnostic testing. It is particularly useful in PCR applications that require high temperatures, such as amplification of GC-rich DNA sequences or long DNA fragments. The high processivity and fast extension rate of Taq DNA polymerase make it well-suited for PCR applications that require rapid amplification.

One of the limitations of Taq DNA polymerase, as mentioned earlier, is that it lacks proofreading activity, which can lead to a higher error rate during DNA synthesis. To address this limitation, modified versions of Taq DNA polymerase have been developed, such as TaqPlus DNA polymerase and Taq DNA polymerase with the addition of proofreading activity. These modified enzymes offer higher fidelity during DNA synthesis while retaining the robustness and speed of Taq DNA polymerase.

In summary, Taq DNA polymerase is a widely used enzyme in PCR applications due to its thermostability and fast extension rate. Its use has enabled the development of many molecular biology applications and has played a critical role in advancing our understanding of genetics and genomics.

استفاده از پلیمراز دی‌ان‌ای Taq

پلیمراز دی‌ان‌ای Taq یکی از آنزیم‌های پرکاربرد در روش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) برای تکثیر دنباله‌های دی‌ان‌ای است. این پلیمراز دی‌ان‌ای ترمواستابل از باکتری Thermus aquaticus به دست می‌آید و مانند بیشتر پلیمرازهای دی‌ان‌ای دیگر که در دمای بالا تخریب می‌شوند، در دمای بالا فعال باقی می‌ماند.

پلیمراز دی‌ان‌ای Taq در روش PCR برای برنامه‌های مختلفی مانند کلونینگ ژنی، روش توالی‌یابی دی‌ان‌ای و آزمایش تشخیصی استفاده می‌شود. این آنزیم به ویژه برای برنامه‌های PCR مناسب است که نیاز به دمای بالایی دارند، مانند تکثیر دنباله‌های دی‌ان‌ای با سرمایش بازویی بالا یا تکثیر قطعات دی‌ان‌ای بلند. سرعت بالا و فرایند پردازشی بالای پلیمراز دی‌ان‌ای Taq آن را برای برنامه‌های PCR مناسب می‌کند که نیاز به تکثیر سریع دارند.

یکی از محدودیت‌های پلیمراز دی‌ان‌ای Taq، که در قبل به آن اشاره شد، عدم توانایی proofreading است که می‌تواند باعث افزایش نرخ خطا در طول سنتز دی‌ان‌ای شود. برای رفع این محدودیت، نسخه‌های تغییر یافته‌ی پلیمراز دی‌ان‌ای Taq، مانند TaqPlus DNA polymerase و Taq DNA polymerase با اضافه کردن توانایی proofreading، توسعه داده شده‌اند. این آنزیم‌های تغییر یافته دقت بالاتری در طول سنتز دی‌ان‌ای ارائه می‌دهند در حالی که هنوز هم از قدرت و سرعت پلیمراز دی‌ان‌ای Taq بهره می‌برند.

به طور خلاصه، پلیمراز دی‌ان‌ای Taq به دلیل ترمواستابلیتی و سرعت بالای تکثیر آن در PCR، یکی از آنزیم‌های پرکاربرد در برنامه‌های PCR است. استفاده از آن موجب توسعه بسیاری از برنامه‌های زیست‌شناسی مولکولی شده و نقش بسیار مهمی در پیشرفت درک ما از ژنتیک و ژنومیک ایفا کرده است.

تاریخچه Taq DNA Polymerase:

زمانی که PCR برای اولین بار مطرح شد، از آنزیم تولید شده توسط باکتری برای انجام این واکنش استفاده می شد. این آنزیم به دمای بالا حساس بوده و باید قبل از شروع هر سیکل به واکنش PCR افزوده می شد. این پروسه سخت و زمانبر بود بنابراین توجه محققین به باکتری های ترموفیل و آنزیم های مقاوم به حرارت جلب شد.
اولین بار آنزیم Taq DNA Polymerase از باکتری ترموفیل Thermus Aquaticus در پارک ملی Yellow stone توسط D.Brock و Hunson Freeze در سال 1969 استخراج شد.
این آنزیم می تواند از منبع اصلی (Thermus Aquaticus) و یا به صورت نوترکیب (کلون و بیان شده در E.coli) بدست بیاید.

ویژگی های Taq DNA Polymerase:

عملکرد

Taq  قابلیت DNA پلیمرازی در جهت ‘ 3→ ‘5 دارد و زنجیره های DNA می سازد. این آنزیم همچنین خاصیت اگزونوکلئازی در جهت’ 3→ ‘5 دارد که باعث آزاد شدن سیگنال فلورسنت از پروب می گردد.

انداره و فعالیت

سایز آنزیم  94KD Taq DNA Polymerase  می باشد بخش پلیمراز این آنزیم در ناحیه C-terminal و بخش اگزونوکلئازی در ناحیه N-terminal آنزیم قرار گرفته است. تا به امروز هیچ فعالیت اگزونوکلئازی در جهت 5’→ 3′ که منجر به حذف اشتباهات طی همانندسازی می شود در Taq DNA Polymerase مشاهده نشده است. آنزیم Taq یک آدنین در انتهای `3 رشته همانند سازی شده اضافه میکند و انتهای چسبنده میسازد. این نوکلئوتید در روش TA کلونینگ حائز اهمیت است. احتمال خطا در عملکرد این آنزیم (5-)^10 برای جهش جانشینی باز (Base-substitution) و (6-)^10 برای جهش تغییر قالب (Frame-shift) است. دمای بهینه برای فعالیت Taq Polymerase 80 درجه سانتیگراد است. این آنزیم برای رسیدن به عملکرد بهینه به NaCl 40 mM و Kcl 60 mM نیاز دارد. غلظت های بیشتر از 100 mM از این کاتیون ها فعالیت آنزیم را مهار می کند. فعالیت Taq Polymerase همچنین به غلظت کاتیون های دو ظرفیتی MgCl_2 و MnCl_2 نیز بستگی دارد. pH بهینه برای فعالیت تگ دی ان ای پلی مراز بین 7 تا 8 می باشد.

Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا:

کیت Taq DNA Polymerase کیاژن (kiagen) از U250 آنزیم تگ دی ان ای پلی مراز و 25 Mm MgCl_2 500ml و 500 ML بافر X10 تشکیل شده است و شما می توانید به کمک این کیت 200 واکنش PCR را انجام دهید. بدین منظور شما تنها نیاز دارید که به موارد فوق dNTP کیاژن فناور آریا ، پرایمرهای فوروارد و ریورس اختصاصی و الگوی مورد نظر خود را بیافزایید. البته در آخر باید حجم نهایی واکنش خود را با آب به مقدار ذکر شده در بروشور کیاژن فناور آریا برسانید.

از Taq DNA Polymerase کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله آنزیم Taq می توانید قطعات با طول ماکسیمم 1.5 Kb را به راحتی در واکنش PCR تکثیر کنید. گزارش شده است که این آنزیم می تواند قطعات DNA تا 3kb را نیز تکثیرکند البته با بازدهی پایین تر.