Kiagene Fanavar Aria M-MuLV Reverse Transcriptase

تاریخچه Reverse Transcriptase

آنزیم رونوشت‌بردار معکوس  یا M-MuLV Reverse Transcriptase ( RT ) توسط Howard Temin در دانشگاه Wisconsin–Madison از ویروس rous sarcoma  کشف شد و سپس توسط David Baltimore در سال 1970 در دانشگاه MIT از ویروس لوسمی موشی و ویروس سارکوم Rous جدا شد. این افراد برای دستاورد خود، جایزه نوبل 1975 در فیزیولوژی و پزشکی را برنده شدند.

ویروس‌های لوسمی موشی MLVs یا MuLVs رتروویروس‌هایی هستند که به دلیل توانایی شان در ایجاد سرطان در میزبان‌های موشی نامگذاری شده‌اند. برخی از MLV ها ممکن است مهره داران دیگر را نیز آلوده کنند. MLV ها شامل ویروس های اگزوژن و آندوژن هستند. MLV های تکثیر شونده دارای یک ژنوم RNA تک رشته ای (ssRNA)  هستند که از طریق یک واسطه DNAو از طریق فرآیند رونویسی معکوس تکثیر می شوند.

رونوشت سازهای معکوس (Reverse Transcriptase به اختصار RT) که به خوبی مطالعه شده اند عبارتند از:

• ترانس کریپتاز معکوس HIV-1 از ویروس نقص ایمنی انسانی نوع 1 . این Reverse Transcriptase دارای دو زیر واحد است که وزن مولکولی آنها 66 و 51 کیلو دالتون است.
• ترانس کریپتاز معکوس M-MuLV از ویروس لوسمی موش مولونی که این Reverse Transcriptase یک مونومر 75 کیلو دالتونی است.
• ترانس کریپتاز معکوس AMV از ویروس میلوبلاستوز پرندگان نیز دو زیرواحد دارد، این آنزیم Reverse Transcriptase شامل یک زیر واحد 63 کیلو دالتون و یک زیر واحد 95 کیلو دالتون است.

ویژگی های M-MuLV Reverse Transcriptase

M-MuLV Reverse Transcriptase یک DNA پلیمراز نوترکیب است که یک رشته DNA مکمل را از RNA تک رشته ای، DNA ویا یک هیبرید RNA : DNA  سنتز می کند. در مقایسه با AMV RT، رونوشت ساز معکوس ویروس لوسمی موش مولونی (M-MLV RT) فاقد فعالیت اندونوکلئازی DNA است و فعالیت RNase H کمتری دارد.

ویژگی های  آنزیم ام ام ال وی ریورس ترانسکریپتاز :

فعالیت بهینه M-MuLV Reverse Transcriptaseدر دمای 37 درجه سانتی گراد می باشد.

آنزیم M-MuLV Reverse Transcriptase  می تواند تا 7kb رشته RNA را به DNA تبدیل کند.

M-MuLV Reverse Transcriptase با حرارت دادن در دمای 70 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه غیرفعال می شود.

از آنزیم  ام ام یو ال وی ریورس ترانسکریپتاز میتوان جهت – سنتز cDNA ، گسترش پرایمر، توالی یابی dsDNA، تهیه کتابخانه های cDNA، و RT-PCR استفاده کرد.

آنزیم M-MuLV Reverse Transcriptase از E. coli بیان کننده ژن  pol M-MLV  بر روی یک پلاسمید به دست می آید.

 این آنزیم از یک زیر واحد با وزن مولکولی 71 کیلو دالتون با 671 اسید آمینه تشکیل شده است.

M-MLV Reverse Transcriptase شرکت کیاژن فناور آریا:

M-MuLV RT یا آنزیم رونوشت ساز معکوس شرکت کیاژن فناور آریا (Kiagene) مقاوم در برابر حرارت بوده و در محدوده دمایی وسیعی (42-52 درجه سانتیگراد) فعالیت خود را حفظ می کند. این ویژگی آن را به ابزاری ایده آل برای رونویسی معکوس RNA هایی با درجه ساختار ثانویه بالا تبدیل می کند. زیرا که ساختار های ثانویه RNA در دمای بالای 45 درجه بسیار کمتر شده و آنزیم M-MuLV Reverse Transcriptase با راندمان بالاتری به رونوشت برداری می پردازد. شرکت Kiagen این آنزیم را برای 10 نانوگرم تا 5 میکروگرم RNA به عنوان الگو به ازای هر واکنش تایید میکند. همچنین شما می توانید برای mRNA حداقل از 5 نانوگرم RNA به عنوان الگو نیز استفاده کنید. این آنزیم در حجم 100 ماکرولیتر برای انجام 50 واکنش مورد استفاده قرار می گیرد.

چرا  M-MLUV RT مورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟

شرکت کیاژن فناور آریا همواره با ارایه محصولات با کیفیت بالا و قیمت مناسب، ارزیابی و نظر مثبتی از پژوهشگران دریافت کرده است. همچنین در مورد آنزیم M-MuLV Reverse Transcriptase شرکت Kiagene یک آنزیم مقاوم به حرارت با عملکرد بالا را با قیمتی بسیار پایین تر از نمونه های مشابه خارجی و داخلی خدمت شما دانشجویان، محققان و پژوهشگران ارایه می کند.

M-MuLV Reverse Transcriptase

Cat. No:

FPLF011.0025

FPLF011.0050

Contents:

Description:

This a genetically modified RNA-dependent DNA polymerase requiring a DNA primer and an RNA template to synthesize a complementary DNA strand. Thermo-resistant H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase has no RNase H activity. Therefore, degradation of RNA does not occur during first strand cDNA synthesis, resulting in higher yields of full-length cDNA from long templates compared to other reverse transcriptases. Thermo-resistant H Minus M -MuLV Reverse Transcriptase maintains activity over a wide temperature range (42-52°C) which makes it an ideal tool for reverse transcription of RNAs having a high degree of secondary structure.

Kit storage:

This kit should be stored at -20 ^oC. Under this condition, reagents are stable for one year from the date of production.

Protocol:

Mix the template RNA (total RNA or Poly (A) mRNA) and the primer in an RNase-free tube as below table. Optimal reaction conditions, such as the amount of RNA and primers, may vary and must be individually determined. Random hexamer or oligo (dT) 16 or specific primers could be used as primers.

Incubate the mixture at 65 ºC for 5 min chill on crash ice and add the reagent as follows:

* If you are using an RNase inhibitor, bring the upper solution to 12 μL and add 1 μL RNase inhibitor 20 U/ul

Incubate the mixture at 65 ºC for 5 min chill on crash ice and add the reagent as follows:

Mix by pipetting gently up and down (total reaction volume 20 μL).

Incubate for 10 min at 25 ºC (omit this for Oligo dt).

Incubate for 60 min at 47 ºC.

Stop the reaction by heating at 70 ºC for 10 minutes. Chill on ice.