کیت سنتز cDNA Reverse transcription kit | cDNA

cDNA Reverse Transcription Kit

Cat. No:

FPLF012.0025

FPLF012.0050

FPLF012.0100

FPLF012.0200

Contents:

Kit storage:

 This kit should be stored at -20 °C.

If properly stored, all kit components are stable until the expiration date printed on the label.

Application

This kit provides a convenient and rapid method to produce single-stranded cDNA from total RNA or mRNA and long mRNA. Kiagene cDNA Reverse Transcription Kit provides all the necessary components for cDNA synthesis except RNA template. The procedure is optimized to achieve reliable results within 90 min.

Handling Requirements and Safety Information

use RNase-free and DNase-free materials

Do not use any modified Protocols.

Do not pool reagents from different lot numbers.

Immediately after usage, close all bottles to avoid leakage, varying buffer concentrations, or buffer conditions.

After first opening store all bottles in an upright position.

Wear protective disposable gloves, laboratory coats, and eye protection, when handling samples and kit reagents.

Do not contaminate the reagents with bacteria, viruses, or nucleases. To remove aliquots from reagent bottles, use disposable pipets and nuclease-free pipet tips only.

Protocol

To each sample

1. Add 1nanogram-5 microgram template RNA (total RNA or mRNA) to a nuclease-free tube.

2. Add 10μl Buffer Mix and 1μl reverse transcriptase Enzyme.

3. Add RNase-Free Water to reach 20μl total. Vortex them quickly.

4. Incubate 10 min at 25 °C

5. Incubate 60 min at 47 °C

6. Incubate 5 min at 85 °C and store at 4°C

مقدمه کیت سنتز cDNA :

کیت سنتز cDNA شامل تمام اجزای لازم برای تبدیل RNA Total یا mRNA به cDNA تک رشته ای می باشد. در علم ژنتیک، cDNA از یک الگوی RNA تک رشته ای (به عنوان مثال، RNA پیام رسان (mRNA) یا microRNA (miRNA)) در واکنشی که توسط آنزیم ترانس کریپتاز معکوس کاتالیز می شود، سنتز می شود.

cDNA مجموعه‌ای از ژن‌هایی است که در موجودات زنده به پروتئین‌ها کدگذاری می‌شوند. cDNA اغلب جهت کلونینگ ژن های یوکاریوتی در پروکاریوت ها استفاده می شود. علاوه بر آن،  cDNA می تواند به عنوان الگو در بسیاری از واکنش­های پایین دستی برای مطالعات RNA مانند بیان ژن عمل کند. بنابراین، سنتز cDNA اولین گام برای انجام بسیاری از پروتکل ها در زیست شناسی مولکولی است.

ویژگی­های کیت سنتز cDNA :

عملکرد: در یک سلول یوکاریوتی رشته cDNA از یک mRNA بالغ با استفاده از آنزیم ترانس کریپتاز معکوس (MMLV RT) ایجاد می شود. در یوکاریوت ها، یک دم پلیA (شامل یک توالی طولانی از نوکلئوتیدهای آدنین) mRNA را از tRNA و rRNA متمایز می کند و بنابراین می تواند به عنوان یک محل آغاز جهت رونویسی معکوس استفاده شود.

فعالیت: هنگامی که mRNA خالص شد، oligo-dT (توالی کوتاهی از نوکلئوتیدهای دئوکسی تیمیدین) به عنوان یک آغازگر مکمل به دم poly-A آن mRNA متصل می شود و یک انتهای 3′-OH آزاد را ایجاد می کند که می تواند توسط آنزیم رونوشت بردار معکوس(MMLV RT) و با استفاده از dNTPها گسترش یابد و cDNA تک رشته ای را ایجاد کند.

کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن فناور آریا:

کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن دارای اجزای زیر است: 1- محلول‌ بافر میکس 2X که خود شامل بافر آنزیم ریورس ترنسکریپتاز (MMLV RT)، مخلوط 1میلی مولار dNTP ، MgCl₂ 8 میلی‌مولار، الیگو d(t) ، هگزامر تصادفی و تثبیت‌کننده می باشد، 2-مخلوط آنزیم که مجددا خود حاوی آنزیم H-minus MMLV مقاوم در برابر حرارت، مهارکننده RNase و تثبیت کننده است، 3- آب تیمار شده با DEPC  سی دی ان ای می باشد.

آنزیم RT استفاده شده در cDNA Synthesis Kit  از نوع H Minus بوده و از ویروس Moloney Murine  Leukemia  استخراج میشود. از مهمترین مزیت های این آنزیم نسبت به  سایر آنزیم های MMLV  قابلیت تحمل حرارت بالای آن است. فعالیت آنزیم MMLV در دمای 50 درجه سانتی گراد ، 100% و در دمای 55 درجه سانتی گراد 80% می باشد.

چرا  کیت سنتز cDNA مورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟

مهمترین بخش  cDNA Synthesis Kit  آنزیم MMuLV میباشد که بصورت بالک از شرکت ThermoFisher تهیه می شود و در آزمایشگاه شرکت کیاژن فناور تقسیم می­شود.

غلظت و قدرت بالای آنزیم، تولید ماهانه و تازه بودن آن و همچنین حساسیت شرکت برای شرایط حمل آنزیم از خارج از کشور به داخل ایران باعث کیفیت فوق العاده مطلوب این کیت شده است. قابلیت سنتز رشته cDNA از روی mRNAهای طویل نیز از دیگر ویژگی های مثبت کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن فناور می باشد.

از کیت سنتز cDNA کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله  cDNA Synthesis Kit می­توانید نمونه های RNA استخراجی خود را در مدت زمان کوتاهی به رشته ای  سی دی ان ای تبدیل کنید.