کیت سنتز cDNA Reverse transcription kit | cDNA
15,000,000 ریال
توضیحات محصول
کیت سنتز cDNA Reverse transcription kit | cDNA
cDNA Reverse Transcription Kit
Cat. No:
FPLF012.0025
FPLF012.0050
FPLF012.0100
FPLF012.0200
Contents:
Kit storage:
This kit should be stored at -20 °C.
If properly stored, all kit components are stable until the expiration date printed on the label.
Application
This kit provides a convenient and rapid method to produce single stranded cDNA from total RNA or mRNA and long mRNA. Kiagene cDNA Reverse Transcription Kit provides all the necessary components for cDNA synthesis except RNA template. The procedure is optimized to achieve reliable results within 90 min.
Handling Requirements and Safety Information
use RNase-free and DNase-free materials
Do not use any modified Protocols.
Do not pool reagents from different lot numbers.
Immediately after usage, close all bottles in order to avoid leakage, varying buffer concentrations or buffer conditions.
After first opening store all bottles in an upright position.
Wear protective disposable gloves, laboratory coats and eye protection, when handling samples and kit reagents.
Do not contaminate the reagents with bacteria, virus, or nucleases. Use disposable pipets and nuclease free pipet tips only, to remove aliquots from reagent bottles.
Protocol
To each sample
- Add 1nanogram-5microgram template RNA (total RNA or mRNA) to a nuclease free tube.
- Add 10μl 2x Buffer and 2μl reverse transcriptase Enzyme.
- Add RNase-Free Water to reach 20μl totally. Vortex them quickly.
- Incubate 10 min at 25 °C
- Incubate 60 min at 47 °C
- Incubate 5 min at 85 °C and store at 4°C
Checking the cDNA synthesis by positive control primer
- Add 10μl 2x PCR Master Mix to a to a nuclease free tube.
- Add 1μl Positive Control primer
- Add 1-5μl cDNA.
- Add RNase-Free Water to reach 20μl totally.
- perform PCR with below program
- Check 7 μl of PCR products by 0.5 % agarose gel electrophoresis. Store cDNA at 4˚C or -20˚C.
PCR product with Control primers should show a band with 230 bp from human, mouse and rat cDNA.
مقدمه کیت سنتز cDNA :
کیت سنتز cDNA شامل تمام اجزای لازم برای تبدیل RNA Total یا mRNA به cDNA تک رشته ای می باشد. در علم ژنتیک، cDNA از یک الگوی RNA تک رشته ای (به عنوان مثال، RNA پیام رسان (mRNA) یا microRNA (miRNA)) در واکنشی که توسط آنزیم ترانس کریپتاز معکوس کاتالیز می شود، سنتز می شود.
cDNA مجموعهای از ژنهایی است که در موجودات زنده به پروتئینها کدگذاری میشوند. cDNA اغلب جهت کلونینگ ژن های یوکاریوتی در پروکاریوت ها استفاده می شود. علاوه بر آن، cDNA می تواند به عنوان الگو در بسیاری از واکنشهای پایین دستی برای مطالعات RNA مانند بیان ژن عمل کند. بنابراین، سنتز cDNA اولین گام برای انجام بسیاری از پروتکل ها در زیست شناسی مولکولی است.
ویژگیهای کیت سنتز cDNA :
عملکرد: در یک سلول یوکاریوتی رشته cDNA از یک mRNA بالغ با استفاده از آنزیم ترانس کریپتاز معکوس (MMLV RT) ایجاد می شود. در یوکاریوت ها، یک دم پلیA (شامل یک توالی طولانی از نوکلئوتیدهای آدنین) mRNA را از tRNA و rRNA متمایز می کند و بنابراین می تواند به عنوان یک محل آغاز جهت رونویسی معکوس استفاده شود.
فعالیت: هنگامی که mRNA خالص شد، oligo-dT (توالی کوتاهی از نوکلئوتیدهای دئوکسی تیمیدین) به عنوان یک آغازگر مکمل به دم poly-A آن mRNA متصل می شود و یک انتهای 3′-OH آزاد را ایجاد می کند که می تواند توسط آنزیم رونوشت بردار معکوس(MMLV RT) و با استفاده از dNTPها گسترش یابد و cDNA تک رشته ای را ایجاد کند.
کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن فناور آریا:
کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن دارای اجزای زیر است: 1- محلول بافر میکس 2X که خود شامل بافر آنزیم ریورس ترنسکریپتاز (MMLV RT)، مخلوط 1میلی مولار dNTP ، MgCl2 8 میلیمولار، الیگو d(t) ، هگزامر تصادفی و تثبیتکننده می باشد، 2-مخلوط آنزیم که مجددا خود حاوی آنزیم H-minus MMLV مقاوم در برابر حرارت، مهارکننده RNase و تثبیت کننده است، 3- آب تیمار شده با DEPC و 4- میکس پرایمر کنترل (B2M) سی دی ان ای می باشد.
آنزیم RT استفاده شده در cDNA Synthesis Kit از نوع H Minus بوده و از ویروس Moloney Murine Leukemia استخراج میشود. از مهمترین مزیت های این آنزیم نسبت به سایر آنزیم های MMLV قابلیت تحمل حرارت بالای آن است. فعالیت آنزیم MMLV در دمای 50 درجه سانتی گراد ، 100% و در دمای 55 درجه سانتی گراد 80% می باشد.
چرا کیت سنتز cDNA مورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟
مهمترین بخش cDNA Synthesis Kit آنزیم MMLV میباشد که بصورت بالک از شرکت ThermoFisher تهیه می شود و در آزمایشگاه شرکت کیاژن فناور تقسیم میشود.
غلظت و قدرت بالای آنزیم، تولید ماهانه و تازه بودن آن و همچنین حساسیت شرکت برای شرایط حمل آنزیم از خارج از کشور به داخل ایران باعث کیفیت فوق العاده مطلوب این کیت شده است. قابلیت سنتز رشته cDNA از روی mRNAهای طویل نیز از دیگر ویژگی های مثبت کیت سنتز cDNA شرکت کیاژن فناور می باشد.
با نگاهی ساده به جدول های زیر می توانید کیت سنتز cDNA تولیدی کیاژن فناور آریا را با شرکت های داخلی و خارجی مقایسه کنید.
مقایسه کیت سنتز cDNA 50تستی شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های تولیدکننده داخلی | |||
---|---|---|---|
نام شرکت | کیاژن فناور آریا | شرکت رقیب داخلی 1 | شرکت رقیب داخلی 2 |
قیمت | 1.200.000T | 1.170.000T | 2.000.000T |
زمان تحویل | فوری(همان روز ثبت سفارش) | 3-4 روزه | 1-2 روزه |
کیفیت | بالا | بالا | بالا |
مقایسه کیت سنتز cDNA 50تستی شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های معتبر خارجی | |||
---|---|---|---|
نام شرکت | کیاژن فناور آریا | Thermo fisher | Norgene |
قیمت | 1.200.000T | 362$ = 10.860.000T | 347$ = 10.410.000T |
زمان تحویل | فوری(همان روز ثبت سفارش) | 1 ماهه | 1 ماهه |
هزینه ارسال | حداقل هزینه(بسته به مسافت) | زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت) | زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت) |
سایر موارد | تضمین رعایت شرایط دمایی حمل مناسب محصول | نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد | نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد |
کیفیت | بالا | بسیار بالا | بسیار بالا |
از کیت سنتز cDNA کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟
شما به وسیله cDNA Synthesis Kit میتوانید نمونه های RNA استخراجی خود را در مدت زمان کوتاهی به رشته ای سی دی ان ای تبدیل کنید.
بررسی تخصصی
سایر ویژگیها | ||
---|---|---|
|
احسان –
درجه یک و عالی