Kiagene Fanavar Aria Taq DNA Polymerase kit

تاریخچه Taq DNA Polymerase:

زمانی که PCR برای اولین بار مطرح شد، از آنزیم تولید شده توسط باکتری برای انجام این واکنش استفاده می شد. این آنزیم به دمای بالا حساس بوده و باید قبل از شروع هر سیکل به واکنش PCR افزوده می شد. این پروسه سخت و زمانبر بود بنابراین توجه محققین به باکتری های ترموفیل و آنزیم های مقاوم به حرارت جلب شد.
اولین بار آنزیم Taq DNA Polymerase از باکتری ترموفیل Thermus Aquaticus در پارک ملی Yellow stone توسط D.Brock و Hunson Freeze در سال 1969 استخراج شد.
این آنزیم می تواند از منبع اصلی (Thermus Aquaticus) و یا به صورت نوترکیب (کلون و بیان شده در E.coli) بدست بیاید.

ویژگی های Taq DNA Polymerase:

عملکرد

Taq  قابلیت DNA پلیمرازی در جهت ‘ 3→ ‘5 دارد و زنجیره های DNA می سازد. این آنزیم همچنین خاصیت اگزونوکلئازی در جهت’ 3→ ‘5 دارد که باعث آزاد شدن سیگنال فلورسنت از پروب می گردد.

انداره و فعالیت

سایز آنزیم Taq DNA Polymerase KD 94 می باشد بخش پلیمراز این آنزیم در ناحیه C-terminal و بخش اگزونوکلئازی در ناحیه N-terminal آنزیم قرار گرفته است. تا به امروز هیچ فعالیت اگزونوکلئازی در جهت→ 5′ 3′ که منجر به حذف اشتباهات طی همانندسازی می شود در Taq DNA Polymerase مشاهده نشده است. آنزیم Taq یک آدنین در انتهای `3 رشته همانند سازی شده اضافه میکند و انتهای چسبنده میسازد. این نوکلئوتید در روش TA کلونینگ حائز اهمیت است. احتمال خطا در عملکرد این آنزیم 10^(-5) برای جهش جانشینی باز (Base-substitution) و 10^(-6) برای جهش تغییر قالب (Frame-shift) است. دمای بهینه برای فعالیت Taq Polymerase 80 درجه سانتیگراد است. این آنزیم برای رسیدن به عملکرد بهینه به NaCl 40 mM و Kcl 60 mM نیاز دارد. غلظت های بیشتر از 100 mM از این کاتیون ها فعالیت آنزیم را مهار می کند. فعالیت Taq Polymerase همچنین به غلظت کاتیون های دو ظرفیتی MgCl_2 و MnCl_2 نیز بستگی دارد. pH بهینه برای فعالیت تگ دی ان ای پلی مراز بین 7 تا 8 می باشد.

Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا:

کیت Taq DNA Polymerase کیاژن (kiagen) از U250 آنزیم تگ دی ان ای پلی مراز و 25 Mm MgCl_2 500ml و 500 ML بافر X10 تشکیل شده است و شما می توانید به کمک این کیت 200 واکنش PCR را انجام دهید. بدین منظور شما تنها نیاز دارید که به موارد فوق dNTP کیاژن فناور آریا ، پرایمرهای فوروارد و ریورس اختصاصی و الگوی مورد نظر خود را بیافزایید. البته در آخر باید حجم نهایی واکنش خود را با آب به مقدار ذکر شده در بروشور کیاژن فناور آریا برسانید.

چرا Taqمورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟

با نگاهی ساده به جدول های زیر می توانید آنزیم Taq  تولیدی کیاژن فناور آریا را با شرکت های داخلی و خارجی مقایسه کنید.

مقایسه 250U Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های تولیدکننده داخلی
نام شرکت	کیاژن فناور آریا	شرکت رقیب داخلی 1	شرکت رقیب داخلی 2
قیمت	88000T	149000T	270000T
زمان تحویل	فوری(همان روز ثبت سفارش)	3-4 روزه	1-2 روزه
کیفیت	بالا	بالا	بالا

مقایسه 250U Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های معتبر خارجی
نام شرکت	کیاژن فناور آریا	Thermo fisher	Roche
قیمت	88000T	1755000T=65$	2350000T=84$
زمان تحویل	فوری(همان روز ثبت سفارش)	1 ماهه	1 ماهه
هزینه ارسال	حداقل هزینه(بسته به مسافت)	زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت)	زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت)
سایر موارد	تضمین رعایت شرایط دمایی حمل مناسب محصول	نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد	نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد
کیفیت	بالا	بسیار بالا	بسیار بالا

از Taq DNA Polymerase کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله آنزیم Taq می توانید قطعات با طول ماکسیمم 1.5 Kb را به راحتی در واکنش PCR تکثیر کنید. گزارش شده است که این آنزیم می تواند قطعات DNA تا 3kb را نیز تکثیرکند البته با بازدهی پایین تر.

شما میتوانید بروشور و نحوه استفاده از Taq DNA Polymerase کیاژن فناور آریا را در زیر مشاهده کنید.

Taq DNA Polymerase

Cat. No: FPLF001.0250

Cat. No: FPLF001.0500

Store at -20 ºC

Contents:

Volume	Components
250U	Taq DNA poly. 5 U/μl
0.5ml	MgCl2 Solution 25 mM
0.5ml	10X Buffer MgCl2 free

Description:

Taq DNA Polymerase is a high quality purified recombinant enzyme and catalyze 5’→3′ synthesis of DNA. The enzyme has no detectable 3’→5′ proofreading exonuclease activity. It is provided with 10X reaction buffer that will enable or improve sub-optimal PCR caused by templates that have a high degree of secondary structure or that are GC-rich.

Kit storage:

This kit should be stored at -20 oC. Under this condition reagents are stable for two years from the date of production.
Protocol:
1) Thaw 10X reaction buffer, dNTP mixture.
2) Mix the master mix thoroughly and dispense appropriate volumes into PCR tubes or plates.

Final Conc.	Volume	Component
1X	2μl	10X Reaction Buffer
1.5mM	1.2μl	MgCl2 Solution 25 mM
0.2mM	0.4μl	40mM dNTPs Mix ( 10mM each)
0.5 pmoles/μl	1μl	Upstream Primer ( 10pmol/ μL)
0.5 pmoles/μl	1μl	Downstream Primer ( 10pmol/ μL)
10fg~1 μg	Variable	Template DNA
-	Variable	PCR grade water
0.065U/μl	0.25μl	Taq DNA poly. 5 U/μl
-	20μl	Total Volume

3) Add templates DNA to the individual PCR tubes or wells containing the master mix.
4) Program the PCR machine according to the program outlined.

Temp ◦C	Time	Cycle
95	4min	1
94 57 72	30sec 30sec 30-60sec	30-35
72	5min	1

Note:

* Extension temperature is between 68 and 72°C.

We highly recommend 68 °C for more efficiency of Taq polymerase.

* For PCR products longer than 3~4 Kb, use an extension time of approximately 1 min per Kb DNA.

* A DNA fragment which is amplified by Taq  polymerase has A overhang, and it enables you to do cloning by using T-vector.

Agarose gel Electrophoresis:

Run the total 5-7 μL of PCR products alongside 3μL DNA marker on a 2% agarose gel containing Green viewer DNA safe stain.

Disclaimers and Addresses:

This product is for Research use only and should

only be used by trained professionals.