Kiagene Fanavar Aria Pfu DNA polymerase 

تاریخچه Pfu DNA polymerase

در سال 1991 اریک ماتور و همکارانش در شرکت بیوتکنولوژی Stratagene، واقع در در لا جولا، کالیفرنیا، Pfu DNA polymerase را کشف کردند که دارای قابلیت همانندسازی بیشتری نسبت به Taq DNA polymerase بود.آنزیم پی اف یو آنزیمی است که در آرکی باکتری هایپرترموفیل Pyrococcus furiosus وظیفه ی همانندسازی DNA را در طول تقسیم سلولی برعهده دارد. در محیط آزمایشگاهی، Pfu جهت همانندسازی DNA در واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) استفاده می‌شود، جایی که آنزیم وظیفه مرکزی ساخت یک رشته جدید DNA را در طول هر مرحله گسترش(extension ) دارد.

ویژگی های Pfu DNA Polymerase:

 pfu DNA polymerase Enzyme یک DNA پلیمراز نوترکیب 90 کیلو دالتونی است که ژن مقاوم به حرارت آن از باکتری Pyrococcus furiosis جدا گشته و به‌صورت نوترکیب بیان و خالص شده است. پی اف یو دی ان ای پلی مراز ، یک DNA پلیمراز خانواده B است که دارای یک دومین اگزونوکلئازی → 5′ 3′ شبه RNase H می باشد. DNA پلیمراز II، نمونه ای از پلیمرازهای خانواده B است.

عملکرد:

آنزیم پی اف یو قابلیت DNA پلیمرازی در جهت ‘ 3→ ‘5 دارد و زنجیره های DNA می سازد. این آنزیم دارای پایداری حرارتی بیشتر و خواص تصحیح کننده در مقایسه با Taq DNA Polymerase است.

برخلاف Taq DNA Polymerase ، Pfu DNA Polymerase دارای فعالیت تصحیح اگزونوکلئازی → 5′ 3′ است، به این معنی که وقتی DNA از انتهای 5′ به انتهای 3′ سنتز می شود، فعالیت اگزونوکلئازی این آنزیم بلافاصله نوکلئوتیدهای نادرست در انتهای 3′ را حذف می کند. درنتیجه رشته DNA تولید شده توسط پی اف یو دی ان ای پلی مراز در واکنش PCR خطای کمتری نسبت به رشته DNA تولید شده توسط Taq DNA Polymerase  خواهند داشت.

Pfu Polymerase تجاری موجود معمولاً نرخ خطای 1 در 1.3 میلیون جفت باز دارد. باید در نظر داشت که Pfu DNA Polymerase دارای عملکرد کندتری نسبت به Taq DNA Polymerase  است و معمولاً برای تکثیر 1 کیلوبایت DNA در دمای 72 درجه سانتیگراد، به 1-2 دقیقه زمان در هر چرخه، نیاز دارد. استفاده از آنزیم پی اف یو در واکنش‌های PCR منجر به تولید محصولات PCR با انتهای صاف می‌شود.

Pfu DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا:

کیت پی اف یو دی ان ای پلی مراز کیاژن فناور از U250 آنزیم پی اف یو و MgCl2 25 Mm 500mL و 500 mL بافر 5X تشکیل شده است و شما می توانید به کمک این کیت 200 واکنش PCR را انجام دهید. بدین منظور شما تنها نیاز دارید که به موارد فوق dNTP کیاژن فناور آریا، پرایمرهای فوروارد و ریورس اختصاصی و DNA الگوی مورد نظر خود را بیافزایید. البته در آخر باید حجم نهایی واکنش خود را با آب به مقدار ذکر شده در بروشور آنزیم پی اف یو کیاژن فناور آریا برسانید.

چرا Pfu DNA Polymerase مورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟

با نگاهی ساده به جدول های زیر می توانید Pfu DNA Polymerase تولیدی کیاژن فناور آریا را با شرکت های داخلی و خارجی مقایسه کنید.

مقایسه Pfu DNA Polymerase U250 شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های تولیدکننده داخلی
نام شرکت	کیاژن فناور آریا	شرکت رقیب داخلی 1	شرکت رقیب داخلی 2
قیمت	260000T	376000T	270000T
زمان تحویل	فوری(همان روز ثبت سفارش)	3-4 روزه	1-2 روزه
کیفیت	بالا	بالا	بالا

مقایسه Taq DNA Polymerase U250 شرکت کیاژن فناور آریا با شرکت های معتبر خارجی
نام شرکت	کیاژن فناور آریا
قیمت	260000T	4500000T=150$	8300000T=277.5$
زمان تحویل	فوری(همان روز ثبت سفارش)	3 ماهه	2ماهه
هزینه ارسال	حداقل هزینه(بسته به مسافت)	زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت)	زیاد(هزینه گمرکی علاوه بر مسافت)
سایر موارد	تضمین رعایت شرایط دمایی حمل مناسب محصول	نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد	نگرانی از رعایت شرایط دمایی و حمل مناسب محصول به علت بعد مسافت زیاد
کیفیت	بالا	بسیار بالا	بسیار بالا

از Pfu DNA Polymerase کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله آنزیم پی اف یو می توانید قطعات با طول ماکسیمم 2Kb را به راحتی با سرعت 0.2kb/min در واکنش PCR تکثیر کنید. پی اف یو دی ان ای پلی مراز یک انتخاب ایده آل برای استفاده در کلونینگ است و می تواند برای قطعات طولانی یا دشوار استفاده شود. این آنزیم عمل proofreading را حین همانندسازی انجام می دهد بنابراین احتمال بروز خطا در توالی رشته سنتز شده به شدت پایین است. همچنین این آنزیم قطعات با انتهای صاف تولید می کند و در انتهای 3` قطعه ی همانندسازی شده توالی اضافی نخواهید داشت.
شما میتوانید بروشور و نحوه استفاده از Pfu DNA Polymerase کیاژن فناور آریا را در زیر مشاهده کنید.

Pfu DNA polymerase

Cat. No: FPLF002.0250

Cat. No: FPLF002.0500

Store at -20 ºC

Contents:

Volume	Components
250U	Pfu DNA poly. 5 U/μl
0.5ml	MgCl2 Solution 25 mM
0.5ml	5X Pfu Buffer MgCl2 free

Description:

Pfu DNA Polymerase is a thermostable enzyme with a molecular weight of 90 kDa. It catalyzes the polymerization of nucleotides into duplex DNA in the 5’_3′ direction, resulting in blunt-ended PCR products without 3′-dA overhangs.
Pfu DNA Polymerase exhibits 3’_5′ exonuclease (proofreading) activity that enables the polymerase to correct the mis-incorporation of nucleotide, and lacks 5’_3′ exonuclease activity. It is suitable for PCR and primer extension reaction that requires high fidelity when the PCR fragment is relatively shorter than 3 kbp. The enzyme exhibits 3´>5´ proofreading activity, resulting in over 10-fold higher PCR fidelity than possible with Taq DNA Polymerases..

Kit storage:

This kit should be stored at -20 oC. Under this condition reagents are stable for two years from the date of production.
Protocol:
1) Thaw 5X reaction buffer , dNTP mixture.
2) Mix the master mix thoroughly and dispense appropriate volumes into PCR tubes or plates.
3) Add templates DNA to the individual PCR tubes or wells containing the master mix.

.Final Conc	Volume	Component
1X	4μl	5X Reaction Buffer
2mM	1.6μl	MgCl2 Solution 25 mM
0.2mM	0.4μl	40mM dNTPs Mix ( 10mM each)
0.5 pmoles/μl	1μl	Upstream Primer ( 10pmol/ μL)
0.5 pmoles/μl	1μl	Downstream Primer (10pmol/ μL)
10fg~1 μg	Variable	Template DNA
-	Variable	PCR grade water
-	0.25μl	Pfu DNA poly. (5 units/μl)
-	20μl	Total Volume

4) Program the PCR machine according to the program outlined.

Temp ◦C	Time	Cycle
95	4min	1
94 57 72	30sec 30sec 60sec	30-35
72	5min	1

Note:

* Longer extension time makes nonspecific bands
* Extension rate for this enzyme is near 500bp/min.

Agarose gel Electrophoresis:

Run the total 5-7 μL of PCR products alongside 3 μL DNA marker on a 2% agarose gel containing Green viewer DNA safe stain.

Disclaimers and Addresses:

This product is for Research use only and should
only be used by trained professionals