Pfu DNA polymerase kit | کیت پی اف یو دی ان ای پلیمراز

Pfu DNA polymerase

Cat. No:

FPLF002.0250

FPLF002.0500

Contents:

Kit storage:

This kit should be stored at -20 ^oC. Under this condition reagents are stable for two years from the date of production.

Description:

Pfu DNA Polymerase is a thermostable enzyme with a molecular weight of 90 kDa. It catalyzes the polymerization of nucleotides into duplex DNA in the 5’_3′ direction, resulting in blunt-ended PCR products without 3′-dA overhangs.

Pfu DNA Polymerase exhibits 3’_5′ exonuclease (proofreading) activity that enables the polymerase to correct the mis-incorporation of nucleotide, and lacks 5’_3′ exonuclease activity. It is suitable for PCR and primer extension reaction that requires high fidelity when the PCR fragment is relatively shorter than 3 kbp. The enzyme exhibits 3´>5´ proofreading activity, resulting in over 10-fold higher PCR fidelity than possible with Taq DNA Polymerases.

Protocol:

1. Thaw 5X reaction buffer , dNTP mixture.
2. Mix the master mix thoroughly and dispense appropriate volumes into PCR tubes or plates.
3. Add templates DNA to the individual PCR tubes or wells containing the master mix.
   

   Pfu DNA polymerase kit | کیت پی اف یو دی ان ای پلیمراز

4. Program the PCR machine according to the program outlined.
   

   Pfu DNA polymerase kit | کیت پی اف یو دی ان ای پلیمراز

Note:

* Longer extension time makes nonspecific bands

* Extension rate for this enzyme is near 500bp/min.

Agarose gel Electrophoresis:

Run the total 5-7 μL of PCR products alongside 3 μL DNA marker on a 2% agarose gel containing Green viewer DNA safe stain.

Disclaimers and Addresses:

This product is for Research use only and should only be used by trained professionals.

————————————————————————————————————-

PFU DNA polymerase and Taq DNA polymerase are both enzymes commonly used in the polymerase chain reaction (PCR) to amplify DNA sequences. However, there are several differences between these two enzymes:

1. Proofreading ability: PFU DNA polymerase has proofreading activity, which means it can correct errors that occur during DNA synthesis, resulting in higher fidelity of DNA amplification. In contrast, Taq DNA polymerase lacks proofreading activity, which can lead to a higher error rate during DNA synthesis.

2. Temperature range: Taq DNA polymerase is derived from a thermophilic bacterium and is therefore active at high temperatures, making it suitable for PCR applications that require high temperatures. PFU DNA polymerase is also thermostable, but it has a narrower temperature range than Taq DNA polymerase and may not be as robust at very high temperatures.

3. Speed: Taq DNA polymerase is a faster enzyme than PFU DNA polymerase, which can be advantageous for certain PCR applications that require rapid amplification.

4. Fragment length: PFU DNA polymerase is better suited for amplifying longer DNA fragments than Taq DNA polymerase. This is because the proofreading ability of PFU DNA polymerase reduces errors that can accumulate over the course of synthesizing a longer DNA strand.

In summary, both PFU DNA polymerase and Taq DNA polymerase have their advantages and disadvantages, and the choice of polymerase depends on the specific PCR application and the desired outcome.

تفاوت‌های PFUپلیمراز  و Taqپلیمراز

پلیمراز دی‌ان‌ای PFU و پلیمراز دی‌ان‌ای Taq هر دو آنزیم‌هایی هستند که برای تکثیر دنباله‌های دی‌ان‌ای در روش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) استفاده می‌شوند. با این حال، چند تفاوت بین این دو آنزیم وجود دارد:

۱. توانایی proofreading: پلیمراز دی‌ان‌ای PFU توانایی proofreading دارد، به این معنی که می‌تواند خطاهایی که در طول سنتز دی‌ان‌ای رخ می‌دهد را اصلاح کند و بالاترین دقت در تکثیر دی‌ان‌ای را ایجاد کند. در مقابل، پلیمراز دی‌ان‌ای Taq توانایی proofreading را ندارد که می‌تواند باعث افزایش نرخ خطا در طول سنتز دی‌ان‌ای شود.

۲. دامنه دمایی: پلیمراز دی‌ان‌ای Taq از یک باکتری ترموفیلیک به دست می‌آید و به همین دلیل در دمای بالا فعال است که آن را برای برنامه‌های PCR مناسب می‌کند که نیاز به دمای بالا دارند. پلیمراز دی‌ان‌ای PFU همچنین ترمواستابل است، اما دامنه دمایی آن از پلیمراز دی‌ان‌ای Taq کمتر است و ممکن است در دمای بسیار بالا به همان اندازه مقاوم نباشد.

۳. سرعت: پلیمراز دی‌ان‌ای Taq یک آنزیم سریع‌تر از پلیمراز دی‌ان‌ای PFU است که برای برنامه‌های PCR خاصی که نیاز به تکثیر سریع دارند، مفید است.

۴. طول قطعه: پلیمراز دی‌ان‌ای PFU برای تکثیر قطعات دی‌ان‌ای بلندتر از پلیمراز دی‌ان‌ای Taq مناسب‌تر است. این به دلیل این است که توانایی proofreading پلیمراز دی‌ان‌ای PFU اشتباهاتی را که در طول سنتز یک رشته دی‌ان‌ای بلند اتفاق می‌افتد را کاهش می‌دهد.

به طور خلاصه، هر دو پلیمراز دی‌ان‌ای PFU و پلیمراز دی‌ان‌ای Taq مزایا و معایب خود را دارند و انتخاب پلیمراز بستگی به برنامه PCR خاص و نتیجه مورد نظر دارد.

تاریخچه Pfu DNA polymerase

در سال 1991 اریک ماتور و همکارانش در شرکت بیوتکنولوژی Stratagene، واقع در در لا جولا، کالیفرنیا، Pfu DNA polymeraase را کشف کردند که دارای قابلیت همانندسازی بیشتری نسبت به Taq DNA polymerase بود.آنزیم پی اف یو آنزیمی است که در آرکی باکتری هایپرترموفیل Pyrococcus furiosus وظیفه ی همانندسازی DNA را در طول تقسیم سلولی برعهده دارد. در محیط آزمایشگاهی، Pfu جهت همانندسازی DNA در واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) استفاده می‌شود، جایی که آنزیم وظیفه مرکزی ساخت یک رشته جدید DNA را در طول هر مرحله گسترش(extension ) دارد.

ویژگی های Pfu DNA Polymerase:

 pfu DNA polymerase Enzyme یک DNA پلیمراز نوترکیب 90 کیلو دالتونی است که ژن مقاوم به حرارت آن از باکتری Pyrococcus furiosis جدا گشته و به‌صورت نوترکیب بیان و خالص شده است. پی اف یو دی ان ای پلی مراز ، یک DNA پلیمراز خانواده B است که دارای یک دومین اگزونوکلئازی → 5′ 3′ شبه RNase H می باشد. DNA پلیمراز II، نمونه ای از پلیمرازهای خانواده B است.

عملکرد:

آنزیم پی اف یو قابلیت DNA پلیمرازی در جهت ‘ 3→ ‘5 دارد و زنجیره های DNA می سازد. این آنزیم دارای پایداری حرارتی بیشتر و خواص تصحیح کننده در مقایسه با Taq DNA Polymerase است.

برخلاف Taq DNA Polymerase ، Pfu DNA Polymerase دارای فعالیت تصحیح اگزونوکلئازی → 5′ 3′ است، به این معنی که وقتی DNA از انتهای 5′ به انتهای 3′ سنتز می شود، فعالیت اگزونوکلئازی این آنزیم بلافاصله نوکلئوتیدهای نادرست در انتهای 3′ را حذف می کند. درنتیجه رشته DNA تولید شده توسط پی اف یو دی ان ای پلی مراز در واکنش PCR خطای کمتری نسبت به رشته DNA تولید شده توسط Taq DNA Polymerase  خواهند داشت.

Pfu Polymerase تجاری موجود معمولاً نرخ خطای 1 در 1.3 میلیون جفت باز دارد. باید در نظر داشت که Pfu DNA Polymerase دارای عملکرد کندتری نسبت به Taq DNA Polymerase  است و معمولاً برای تکثیر 1 کیلوبایت DNA در دمای 72 درجه سانتیگراد، به 1-2 دقیقه زمان در هر چرخه، نیاز دارد. استفاده از آنزیم پی اف یو در واکنش‌های PCR منجر به تولید محصولات PCR با انتهای صاف می‌شود.

Pfu DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا:

کیت پی اف یو دی ان ای پلی مراز کیاژن فناور از U250 آنزیم پی اف یو و MgCl2 25 Mm 500mL و 500 mL بافر 5X تشکیل شده است و شما می توانید به کمک این کیت 200 واکنش PCR را انجام دهید. بدین منظور شما تنها نیاز دارید که به موارد فوق dNTP کیاژن فناور آریا، پرایمرهای فوروارد و ریورس اختصاصی و DNA الگوی مورد نظر خود را بیافزایید. البته در آخر باید حجم نهایی واکنش خود را با آب به مقدار ذکر شده در بروشور آنزیم پی اف یو کیاژن فناور آریا برسانید.

از Pfu DNA Polymerase کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله آنزیم پی اف یو می توانید قطعات با طول ماکسیمم 2Kb را به راحتی با سرعت 0.2kb/min در واکنش PCR تکثیر کنید. پی اف یو دی ان ای پلی مراز یک انتخاب ایده آل برای استفاده در کلونینگ است و می تواند برای قطعات طولانی یا دشوار استفاده شود. این آنزیم عمل proofreading را حین همانندسازی انجام می دهد بنابراین احتمال بروز خطا در توالی رشته سنتز شده به شدت پایین است. همچنین این آنزیم قطعات با انتهای صاف تولید می کند و در انتهای 3` قطعه ی همانندسازی شده توالی اضافی نخواهید داشت.
شما میتوانید بروشور و نحوه استفاده از Pfu DNA Polymerase کیاژن فناور آریا را در زیر مشاهده کنید.