ایکس گال

ایکس گال یا 5 برومو 4 کلرو 3 ایندولیل β D گالاکتوپانوزوزید یا BCIG یک سوبسترای کروموژنیک برای آنزیم بتا گالاکتوزیداز است که رنگ آبی تولید می‌کند که به‌راحتی ازنظر بصری از پس‌زمینه قابل تشخیص است.

این ماده سوبسترای انتخابی برای غربالگری رنگ آبی و سفید کلنی‌های نوترکیب با ژنوتیپ لاکتوز مثبت است. سوبسترای کروموژنیک این ماده برای تشخیص فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز در کلنی‌های نوترکیب باکتریایی استفاده می‌شود.

ماده اشاره شده توسط آنزیم بتا گالاکتوزیداز در پیوند بتا 1 به 4 بین گالاکتوز و بخش برومو 4 کلرو 3 ایندولیل شکسته می‌شود. برش ماده فوق‌الذکر باعث تولید رسوب آبی‌رنگ و غیر محلول دی کلرو دی برومو-ایندیگو می‌شود.

در کلونینگ با وکتورهایی مانند Lambda 11، M13mp18، pUC18، و pUR222، ژن lacZ باکتری اشریشیا کلی به سلول‌های مثبت ترانسفورم می‌شود. بعد از ترانسفورماسیون، سلول‌ها فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز را در حضور محیط حاوی این ماده و IPTG نشان می‌دهند. قرار دادن یک قطعه DNA در ناحیه کلونینگ ژن lacZ باعث اختلال فعالیت آنزیم بتا-گالاکتوزیداز می‌شود که درنهایت منجر به ظهور کلنی‌های سفید می‌شود.

سلول‌های باکتریایی که بتا گالاکتوزیداز فعال را حفظ می‌کنند، مستقیماً به کلونی‌های آبی تبدیل می‌شوند. از کاربردهای دیگر X-Gal می‌توان به‌عنوان سوبسترای برای تشخیص فعالیت بتا-گالاکتوزیداز در تست‌های ایمونولوژیک مرتبط با آنتی‌بادی β-گالاکتوزیداز، تشخیص کولپاژ بر اساس القاء بتا-گالاکتوزیداز و تشخیص شکل‌گیری میکرومتاستازی در طی پیشرفت تومور اشاره نمود.

آنزیم‌های گلیکوزیداز انتخاب بسیار بالایی را برای هیدرولیز قندهای ترجیحی خود نشان می‌دهند. به‌عنوان مثال، β-galactosidase به‌سرعت β-D galactopyranosides را هیدرولیز می‌کند اما معمولاً α-D-galactopyranosides آنومریک یا β-D-glucopyranosides ایزومر را هیدرولیز نمی‌کند.

فعالیت گلیکوزیداز درون‌زا اغلب برای مشخص کردن سویه‌های میکروارگانیسم‌ها و لیبل زدن انتخابی اندامک‌های سلول‌های پستانداران استفاده می‌شود. نقص در فعالیت گلیکوزیداز مشخصه چندین بیماری است.

همچنین شما می توانید انواع محصولات بیولوژی مولکولی را در سایت آثل طب مشاهده نمایید و با مراجعه به سایت Sigma-Aldrich ، محصول را مشاهده نمایید .

کاربرد ایکس گال

X-Gal یک سوبسترای کروموژنیک برای β-galactosidase است که یک رنگ آبی پررنگ تولید می‌کند که به‌راحتی از پس‌زمینه قابل تشخیص است. X-Gal یک سوبسترا برای انتخاب کلنی‌های نوترکیب آبی-سفید باکتریایی با ژنوتیپ لاکتوز مثبت است.

عملکرد بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی
دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد