Kiagene Fanavar Hot start Taq DNA Polymerase

Hot-start Taq DNA polymerase

Cat. No:

FPLF003.0250

FPLF003.0500

Contents:

Description:

This DNA polymerase is a mixture of Taq DNA polymerase and a temperature sensitive ,aptamerbased inhibitor. The inhibitor binds reversibly to the enzyme, inhibiting polymerase activity at temperatures below  40 °C, but releases the enzyme during normal PCR cycling conditions. The aptamerbased hot start mechanism does not require a separate high temperature incubation step toactivate the enzyme. The enzyme is inactive at room temperature, avoiding extension of non-specifically annealed primers or primer dimers and providing higher specificity of DNA amplification. The activated enzyme maintains the same functionality as Taq DNA polymerase: it catalyzes 5′ → 3′ synthesis of DNA, has no detectable 3′ → 5′ proofreading exonuclease activity.

Kit storage:

This kit should be stored at -20 ^oC. Under this condition reagents are stable for two years from the date of production.

Protocol:

• Thaw 10X reaction buffer, dNTP mixture.

• Mix the master mix thoroughly and dispense appropriate volumes into PCR tubes or plates.
• Add templates DNA to the individual PCR tubes or wells containing the master mix.

• Program the PCR machine according to the program outlined.

Note:

* Extension temperature is between 68 and 72°C.We highly recommend 68 °C for more efficiency of Hot start Taq DNA polymerase.

* For PCR products longer than 3~4 Kb, use an extension time of approximately 1 min per Kb DNA.

* A DNA fragment which is amplified by Taq DNA polymerase has A overhang, and it enables you to do cloning by using T-vector.

Agarose gel Electrophoresis:

Run the total 5-7 μL of PCR products alongside 3μL DNA marker on a 2% agarose gel containing Green viewer DNA safe stain.

تاریخچه Hot start Taq DNA Polymerase

از آنجایی که نتایج PCR بسیار مهم است، تغییرات زیادی در این روش به منظور دستیابی به بازده بالاتر ایجاد شدکه Hot start PCR یکی از آنهاست. Hot start PCR شکل اصلاح شده ای از واکنش زنجیره ای پلیمراز معمولی (PCR) است که حضور محصولات نامطلوب غیر اختصاصی DNA و دایمرهای پرایمر را در دمای اتاق (یا سردتر) کاهش می دهد. در این واکنش از Hot start Taq DNA Polymerase  استفاده می شود که از همان اصول PCR  معمولی پیروی می کند.

به این صورت که DNA پلیمراز برای سنتز DNA از یک الگوی تک رشته ای استفاده می کند، در این روش مهار کننده  Taq polymerase، برای افزایش بازده محصول و همچنین ارائه ویژگی و حساسیت به آنزیم متصل شده و از فعالیت آنزیم خودداری میکند و این امر موجب کاهش اتصال غیر اختصاصی و یا تشکیل دایمرهای آغازگر می شود. سپس  از گرمایش برای غیرفعال کردن مهار کننده متصل شده به Taq پلیمراز استفاده می شود و آنزیم در دمای مورد نظر فعال می شود.

ویژگی­های Hot Start Taq DNA Polymerase:

در PCR معمولی، مخلوط واکنش در دمای اتاق کامل می شود و به دلیل فعالیت DNA پلیمراز، پرایمرها ممکن است دایمرهای پرایمری تشکیل دهند یا به طور غیر اختصاصی به DNA متصل شوند. در  PCR معمولی ، DNA پلیمراز هر قطعه ای از DNA را با پرایمرهای متصل شده گسترش می دهد و محصولات هدف و همچنین محصولات غیر اختصاصی تولید می کند که بازده را کاهش می دهد.

در روش Hot start PCR که با استفاده از هات استارت تگ دی ان ای پلی مراز  انجام می شود، آنزیم تا رسیدن به دمای 95 درجه سلسیوس غیر فعال نگه داشته میشود. این امر به نوبه خود احتمال گسترش غیر اختصاصی DNA و تأثیر اتصال پرایمر غیر اختصاصی قبل از دناتوراسیون را کاهش می دهد.

Hot Start Taq DNA Polymerase مخلوطی از Taq DNA Polymerase و یک مهارکننده مبتنی بر آپتامر است. بازدارنده به طور برگشت پذیر به آنزیم متصل می شود و فعالیت پلیمراز را در دمای کمتر از 95 درجه سانتی گراد مهار می کند. هنگامی که دمای مخلوط واکنش PCR در طول مرحله اولیه دناتوره کردن DNA چرخه PCR به 95 درجه سانتیگراد برسد، فعالیت Taq DNA پلیمراز به طور کامل احیا می شود.  از ویژگی های این محصول می توان به

تقویت اختصاصیت در ساخت زنجیره DNA

کاهش تشکیل پرایمر-دایمر

افزایش بازده محصولات PCR

افزایش راحتی اجرای مراحل پیش از PCR در دمای اتاق (مفید در کاربردهایی مانند کلنی PCR)

 Hot Start Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا:

Hot start Taq شرکت کیاژن فناور آریا یک DNA پلیمراز مقاوم در برابر حرارت است که دارای فعالیت پلیمراز3′ → 5’و فعالیت اندونوکلئاز 3’→5′ است. این محصول شرکت kiagene همراه با بافر PCR و  MgCl2، ارائه می شود.

خلوص فیزیکی این آنزیم شرکت کیاژن فناور آریا بیشتر از ٪98 است که با روش SDS-PAGE با رنگ آمیزی blue Coomassie ارزیابی شده است (شکل زیر را ببینید).

آنزیم Hot start Taq شرکت کیاژن فناور آریا از سویه E. coli بیان کننده ژن Taq DNA Polymerase از Thermus aquaticus YT-1 استخراج می شود.

از Hot Start Taq DNA Polymerase کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

شما به وسیله  Hot Start Taq DNA Polymerase شرکت کیاژن فناور آریا می­توانید قطعات با طول ماکسیمم 1.5 Kb را به راحتی در واکنش PCR تکثیر کنید. گزارش شده است که این آنزیم می تواند قطعات  DNA تا Kb 3 را نیز تکثیرکند البته با بازدهی پایین تر.