مقدمه

(بافر TAE) بافر یک جزء مهم در هر واکنش بیولوژیک است. بافر بیولوژیک ترکیبی از اسید ضعیف و باز مزدوج یا برعکس است که به ثابت نگه داشتن pH محلول کمک می کند. Tris-borate EDTA و Tris-acetate EDTA دو نوع متداول محلول بافری مورد استفاده در الکتروفورز ژل آگارز DNA هستند.

ویژگی­های بافر الکتروفورز TAE/TBE

عملکرد و وظایف بافر الکتروفورز:

• pH واکنش را تقریباً خنثی نگه می دارد. اسید و باز ضعیف موجود در بافر، pH را در محدوده مورد نظر نگه می دارند.
• با حفظ pH خنثی، بار خالص مولکول ها را کنترل می کند که به مهاجرت و جداسازی صحیح مولکول کمک می کند.
• بافر الکتروفورز ژل DNA، از حمله DNase به DNA جلوگیری می کند. همچنین این بافر با فراهم کردن یک محیط مایع ثابت، از هیدرولیز مولکول های DNA جلوگیری می کند.
• محیط مایع تغییرات دما را در طول الکتروفورز ژل کنترل می کند. ولتاژ بالا دمای ژل آگارز را افزایش می دهد که می تواند منجر به دناتوره شدن DNA شود. این افزایش جزئی دما، توسط محیط مایع بافر کنترل می شود.
• بافر در طول الکتروفورز، بار را به طور مساوی توزیع می کند.

نقش TAE/TBE در الکتروفورز:

• تریس یک باز قوی و بورات یک اسید است، ترکیب این دو، PH را تقریباً خنثی و در محدوده 8 تا 8.5 حفظ می کند. تحت این شرایط قلیایی، DNA محافظت می شود و می تواند به درستی جدا شود.
• EDTA نقش مهمی در قافر الکتروفورز دارد. EDTA یک عامل چلاته کننده است. این یون Mg2+ را که کوفاکتور آنزیم DNAse است، چلاته می کند. DNAse آنزیمی است که DNA را به قطعات کوچک تقسیم می کند. بنابراین با افزودن EDTA، DNA از فعالیت آنزیمی محافظت می شود.
• بافر الکتروفورز همچنین بار مولکول های آب را خنثی می کند. تحت جریان الکتریکی، مولکول آب به H+ و OH- تجزیه می شود. یون های H+ می توانند با گروه های فسفات DNA واکنش دهند. بنابراین بار منفی بافر، بار آب را خنثی می کند و از DNA محافظت می کند.

مزایا و معایب TAE/TBE:

اگرچه بافر TAE و بافر TBE در الکتروفورز یکسان عمل می کنند، اما هر دو مزایا و معایب خاص خود را دارند.

• بافر TAE می تواند در واکنش آنزیمی DNAse مداخله کند و از DNA محافظت کند، در مقابل، بافر TBE نمی تواند.
• TAE ظرفیت بافر کمتری دارد در حالی که TBE ظرفیت بافری بالاتری نسبت به بافر TAE دارد.
• بورات موجود در TBE می تواند با قند موجود درد ساختار DNA واکنش دهد، بنابراین استفاده از آن همیشه توصیه نمی شود.
• اگر گلیسرول در DNA Loading Dye موجود باشد، TBE انتخاب مناسبی نیست. بورات با گلیسرول واکنش می دهد و عملکرد رنگ بارگذاری DNA را کاهش می دهد. بنابراین اگر گلیسرول جزء اصلی در رنگ بارگذاری DNA باشد، بافر TAE بهترین انتخاب برای به دست آوردن نتیجه خوب است.

ویژگی های TAE:

• ظرفیت بافر کمتری نسبت به TBE دارد بنابراین با استفاده مکرر عملکردش ضعیف می شود.
• رسانایی بافر TAE بهتر از TBE است بنابراین dsDNA می تواند سریعتر در آن حرکت کند.
• DNA را می توان به راحتی در بافر TAE ریکاوری کرد بنابراین نرخ ریکاوری در بافر TAE بالاتر از TBE است.
• بافر TAE مقرون به صرفه و ارزان تر از سایر سیستم های بافری است، علاوه بر این، در غلظت های پایین تر به عنوان working solution مورد استفاده قرار می گیرد. (بافر 5X مورد نیاز است).

ویژگی های TBE:

• TBE به دلیل وجود بورات ظرفیت بافری بالاتری نسبت به TAE دارد.
• به دلیل رسانایی کمتر، مهاجرت dsDNA در بافر TBE در مقایسه با بافر TAE کمتر است.
• وضوح باندهای DNA برای قطعات طولانی بسیار خوب است.
• بورات بسیاری از آنزیم های تجزیه کننده DNA را مهار می کند، بنابراین یکپارچگی DNA در بافر TBE بالاتر است.
• بافر TBE کمی پرهزینه است و در غلظت های بالاتر به عنوان working solution مورد استفاده قرار می گیرد. (بافر 1X مورد نیاز است).
• بورات در این بافر می تواند با DNA تعامل داشته باشد بنابراین نرخ ریکاوری نمونه در مقایسه با بافر TAE کمتر است.

بافر TAE شرکت کیاژن فناور آریا:

بافر TAE با غلظت 10X ، pH حدود 8 ، کیفیت بالا و قیمت مناسب در شرکت کیاژن فناور آریا تولید و در حجم 500 میلی لیتر عرضه می شود. از این بافر می توان غلظت مناسب تهیه و در الکتروفورز ژل DNA استفاده کرد.

چرا  بافر 10X TAE مورد نیاز خود را از شرکت کیاژن فناور آریا بخریم؟

با نگاهی ساده به جدول های زیر می توانید بافرهای تولیدی کیاژن فناور آریا را با شرکت های داخلی و خارجی مقایسه کنید.

از بافر 10X TAE کیاژن فناور آریا چه استفاده ای می شود کرد؟

این بافر را می توان در غلظت مناسب تهیه و به عنوان رانینگ بافر در الکتروفورز ژل DNA استفاده کرد.