بافر لیز کننده ریپا | RIPA Lysis Buffer Recipe protocol
بافر لیز کننده ریپا (RIPA) برای لیز دیواره سلولی استفاده می‌شود اگر حاوی مهارکننده‌های پروتئاز باشد از آن برای استخراج پروتئین‌ها در سلول‌های پستانداران می‌توان استفاده نمود. بافر لیز کننده RIPA توانایی دناتوراسیون قوی‌تری نسبت به تریتون X-100 (Triton X-100) یا NP-40 دارد و برای تخریب غشاهای هسته‌ای در پروسه استخراج هسته استفاده می‌شود. بافر استخراج و لیز RIPA حاوی دترجنت های غیر یونی و یونی است که قادر به استخراج پروتئین از انواع مختلف سلول‌ها و ساختارهای غشایی و بافت‌ها هستند. بافر RIPA باعث لیز سلول می‌شوند و از تخریب پروتئین و تداخل آن در واکنش‌پذیری ایمونولوژیکی و فعالیت بیولوژیکی آن جلوگیری می‌کند.
این بافر مناسب برای تهیه نمونه جهت وسترن‌بلات(WB)، ELISA ، SDS-PAGE، IP،Co-IP، تخلیص پروتئین و سنجش‌های آنزیمی و همچنین لیز سلول‌ها و بافت‌ها در آزمایش ایمونوپرسیپیتاسیون می‌باشد.
ریپا لایزیز بافر
| معرف | غلظت نهایی |
|---|---|
| NaCl | 150 mM |
| Nonidet P-40 | 1% |
| DOC | 0.5% |
| SDS | 0.1% |
| Tris (pH 7.4) | 50 mM |
بافر RIPA آماده شده باید در دمای 20- درجه سانتی گراد ذخیره شود. قبل از استفاده فوری، مهارکننده‌های پروتئاز و/یا فسفاتاز را به مقدار ذوب شده اضافه کنید. باقی مانده را دور بریزید و دوباره منجمد نکنید. یک میلی لیتر بافر برای لیز کردن تقریباً 5 میلیون سلول کافی است.
RIPA Lysis Buffer
| Reagent | Final concentration |
|---|---|
| NaCl | 150 mM |
| Nonidet P-40 | 1% |
| DOC | 0.5% |
| SDS | 0.1% |
| Tris (pH 7.4) | 50 mM |
Prepared RIPA buffer should be aliquoted and stored at −20°C. Add protease and/or phosphatase inhibitors to a thawed aliquot before immediate use. Discard and do not freeze again. One milliliter of buffer is sufficient to lyse approximately 5 million cells.
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
