دستورالعمل و پروتکل تهیه محلول سالین فسفات |Phosphate-buffered saline (PBS)
PBS is is one of the most used buffers and is an isotonic buffer frequently used in biological applications, such as washing cells, transportation of tissues, and dilutions. PBS closely mimics the pH, osmolarity, and ion concentrations of the human body. Since it is nontoxic to cells, it is extensively used for cell container rinsing and other preparations that might leave a residue. It is simple to prepare and has good shelf life, but will precipitate in the presence of zinc ions. The reagents required to prepare 1× or 10× buffer are listed in the table below.
| Reagent | Amount to add (for 1× solution) | Final concentration (1×) | Amount to add (for 10× stock) | Final concentration (10×) |
|---|---|---|---|---|
| NaCl | 8 g | 137 mM | 80 g | 1.37 M |
| KCl | 0.2 g | 2.7 mM | 2 g | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1.44 g | 10 mM | 14.4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0.24 g | 1.8 mM | 2.4 g | 18 mM |
| Reagent | Amount to add (for 1× solution) | Final concentration (1×) | Amount to add (for 10× stock) | Final concentration (10×) |
|---|---|---|---|---|
| CaCl2•2H2O | 0.133 g | 1 mM | 1.33 g | 10 M |
| MgCl2•6H2O | 0.10 g | 0.5 mM | 1.0 g | 5 mM |
Phosphate-buffered saline (PBS)| دستورالعمل و پروتکل تهیه محلول سالین فسفات
PBS یکی از پرکاربردترین بافرها است و یک بافر ایزوتونیک است که اغلب در کاربردهای بیولوژیکی مانند شستشوی سلول ها، انتقال بافت ها و رقت سازی ها استفاده می شود. PBS دقیقاً pH، اسمولاریته و غلظت یون بدن انسان را تقلید می کند. از آنجایی که برای سلول‌ها سمی نیست، به طور گسترده برای شستشوی ظروف سلولی و سایر آماده‌سازی‌هایی که ممکن است باقی‌مانده باقی بگذارند، استفاده می‌شود. تهیه آن ساده است و ماندگاری خوبی دارد، اما در حضور یون روی رسوب می کند. معرف های مورد نیاز برای آماده سازی بافر1× یا 10× در جدول زیر قرار داده شده است.
| مواد مورد نیاز | مقادیر برای ساخت بافر یک برابر | غلظت یک برابر | مقادیر مورد نیاز برای ساخت غلظت ۱۰ برابر | غلظت نهایی ۱۰ برابر |
|---|---|---|---|---|
| NaCl | 8 g | 137 mM | 80 g | 1.37 M |
| KCl | 0.2 g | 2.7 mM | 2 g | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1.44 g | 10 mM | 14.4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0.24 g | 1.8 mM | 2.4 g | 18 mM |
| در صورت نیاز در بافر پی بی اس مواد زیر با مقادیر مشخص شده اضافه شود | ||||
| CaCl2•2H2O | 0.133 g | 1 mM | 1.33 g | 10 mM |
| MgCl2•6H2O | 0.10 g | 0.5 mM | 1.0 g | 5 mM |
PBS را می توان به صورت محلول 1× یا استوک 10× ساخت. برای تهیه 1 لیتر ×PBS 1 یا ×10، معرف های ذکر شده در بالا را در 800 میلی لیتر H2O حل کنید. pH را با HCl روی 7.4 (یا 7.2، در صورت نیاز) تنظیم کنید و سپس H2O را به 1 لیتر اضافه کنید. محلول را به مقدار کافی بریزید و آنها را با اتوکلاو کردن به مدت 20 دقیقه با سرعت 15 psi (1.05 کیلوگرم بر سانتی متر مربع) توسط دستگاه استریل کنید. می توانید PBS (بافر فسفات بافر) را در دمای اتاق نگهداری کنید. نگهداری استوک 10× در 4 درجه سانتیگراد ممکن است منجر به تشکیل کریستال ها شود.
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
