دستورالعمل و پروتکل تهیه بافر رقتACF dilution buffer recipe protocol| ACF
ACF dilution buffer is a solution used to dilute ACF dye, which is a fluorescent dye used in fluorescence in situ hybridization (FISH). The ACF dilution buffer helps maintain the stability and integrity of the ACF dye during the FISH process.
The ACF dilution buffer usually contains Tris-EDTA buffer, which helps maintain the pH and ionic strength of the solution. It also contains detergents such as Triton X-100 that help dissolve the ACF dye and prevent it from clumping. In addition, the ACF dilution buffer may contain other components, such as bovine serum albumin (BSA), which help reduce non-specific binding of the ACF dye to chromosomes.
The ACF dilution buffer is an important component of the FISH procedure, as it helps ensure that the ACF dye is properly diluted and remains stable throughout the experiment. This is necessary to obtain accurate and reliable results from the FISH method.
ACF dilution buffer
Insulin, human, recombinant (Roche)
Prepare 0.4 mg/mL insulin in wash buffer F.
wash buffer F:
0.2 mM EDTA
15% (v/v) glycerol
2 mM MgCl2
150 mM NaCl
0.01% (v/v) Nonidet P-40
20 mM Tris-Cl (pH 7.9)
Store solution for up to 24 h at 4°C.
Immediately before use, add:
10 mM β-glycerophosphate
1 μg/mL aprotinin
0.5 mM benzamidine hydrochloride
1 mM DTT (dithiothreitol)
2 μg/mL leupeptin
0.2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride
بافر رقت ACF محلولی است که برای رقیق کردن رنگ ACF استفاده می شود، که یک رنگ فلورسنت است که در هیبریداسیون فلورسانس در محل (FISH) استفاده می شود. بافر رقت ACF به حفظ ثبات و یکپارچگی رنگ ACF در طول فرآیند FISH کمک می کند.
بافر رقت ACF معمولاً حاوی بافر Tris-EDTA است که به حفظ pH و قدرت یونی محلول کمک می کند. همچنین حاوی مواد شوینده ای مانند Triton X-100 است که به حل شدن رنگ ACF و جلوگیری از تجمع آن کمک می کند. علاوه بر این، بافر رقت ACF ممکن است حاوی اجزای دیگری مانند آلبومین سرم گاوی (BSA) باشد که به کاهش اتصال غیر اختصاصی رنگ ACF به کروموزوم ها کمک می کند.
بافر رقت ACF جزء مهمی از روش FISH است، زیرا کمک می کند تا اطمینان حاصل شود که رنگ ACF به درستی رقیق شده و در طول آزمایش پایدار می ماند. این برای به دست آوردن نتایج دقیق و قابل اعتماد از روش FISH ضروری است.
0.4mg/ml انسولین را در بافر شستشوی F تهیه کنید.
پروتکل بافر شستشوی F :
0.2 میلی متر EDTA
15% (v/v) گلیسرول
2 میلی مولار MgCl2
150 میلی مولار NaCl
0.01% (v/v) Nonidet P-40
20 میلی مولار Tris-Cl (pH 7.9)
محلول را تا 24 ساعت در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
بلافاصله قبل از استفاده، مواد زیر را اضافه کنید:
10 میلی مولار β-گلیسروفسفات
1 میکروگرم در میلی لیتر آپروتینین
0.5 میلی مولار بنزامیدین هیدروکلراید
1 میلی‌مولار DTT (دی تیوتریتول)
2 میکروگرم در میلی لیتر لوپپتین
0.2 میلی مولار فنیل متیل سولفونیل فلوراید
