در زیست‌شناسی، “مخلوط استیل‌اسیلاسیون” به محلول یا مخلوطی اشاره دارد که شامل اجزا برای انجام واکنش‌های استیل‌اسیلاسیون می‌باشد. استیل‌اسیلاسیون یک فرآیند شیمیایی است که شامل افزودن گروه استیل COCH3 به یک مولکول می‌شود، که اغلب ویژگی‌ها، عملکرد یا تعاملات آن را تغییر می‌دهد. مخلوط استیل‌اسیلاسیون شرایط، ترکیبات و محیط لازم را برای تسهیل جا به جایی واکنش استیل‌اسیلاسیون فراهم می‌کند.
اجزای خاص مخلوط استیل‌اسیلاسیون ممکن است بسته به کاربرد مورد نظر و مولکول‌های در حال استیل‌اسیلاسیون متغیر باشد. با این حال، یک مخلوط استیل‌اسیلاسیون معمولاً شامل موارد زیر می‌شود:
۱. اهداکننده استیل: این منبع گروه استیل است که به مولکول هدف اضافه می‌شود. اهدا کننده های معمول استیل مانند استیل کوآنزیم A ،استیل کوآ یا انیدرید استیلی می‌باشند.
۲. مولکولی که باید استیله شود: مولکولی که به استیل‌اسیلاسیون خواهد رفت در مخلوط حاضر است.
۳. کاتالیزور یا آنزیم: برخی از واکنش‌های استیل‌اسیلاسیون ممکن است نیاز به حضور کاتالیزور یا آنزیم داشته باشند تا جا به جایی گروه استیل را تسهیل کند. آنزیم‌هایی مانند هیستون استیل‌ترانسفرازهاHATs معمولاً در زمینه‌های زیستی استفاده می‌شوند.
۴. بافر واکنش: محلول بافر به منظور حفظ pH مناسب و شرایط یونی برای واکنش در مخلوط حاضر است.
۵. کوفاکتورها یا کوسوبسترا: برخی از واکنش‌ها ممکن است نیاز به مولکول‌ها، یون‌ها یا کوفاکتورها داشته باشند تا پیشرفت صحیح فرآیند استیل‌اسیلاسیون را تضمین کنند.
مخلوط استیل‌اسیلاسیون در زمینه‌های زیستی مختلف استفاده می‌شود، از جمله:
-استیل‌اسیلاسیون هیستون: استیل‌اسیلاسیون پروتئین‌های هیستون نقش مهمی در تنظیم ژنی و بازسازی کروماتین دارد. مخلوط‌های استیل‌اسیلاسیون برای مطالعه تأثیر اصلاح هیستون بر ساختار کروماتین و عملکرد ژنی استفاده می‌شوند.
– استیل‌اسیلاسیون پروتئین: استیل‌اسیلاسیون روی باقیمانده‌های آمینه خاص در پروتئین‌ها می‌تواند بر عملکرد، پایداری و تعاملات آنها تأثیر بگذارد. مخلوط‌های استیل‌اسیلاسیون برای بررسی تأثیر استیل‌اسیلاسیون پروتئین بر فرآیندهای سلولی استفاده می‌شوند.
– مطالعات شیمیایی زیستی: مخلوط‌های استیل‌اسیلاسیون می‌توانند برای تغییر ترکیبات مولکول‌های کوچک یا ترکیبات به منظور مطالعه تأثیر آنها بر مسیرها یا فرآیندهای زیستی مورد استفاده قرار گیرند.
ترکیب و تهیه یک مخلوط استیل‌اسیلاسیون بستگی به نیازهای آزمایشی و اهداف خاص دارد. مانند هر واکنش شیمیایی دیگر، در هنگام کار با مخلوط‌های استیل‌اسیلاسیون، تحت نظارت و اصول ایمنی باید رعایت شود.
در زیست‌شناسی، عبارت DMF مخفف Dimethylformamide است. این محلول که به اختصار DMF نیز شناخته می‌شود، به علت توانایی حل و محلول‌پذیری در گستره‌ای از ترکیبات آلی و غیرآلی، در مختلف برنامه‌های آزمایشگاهی و زیست‌شناسی مورد استفاده قرار می‌گیرد. DMF یک حلال آپروتیک است، به این معنا که می‌تواند هم ذاتاً قطبی باشد و هم غیرقطبی، که این ویژگی‌اش باعث چندانه بودن استفاده‌های مختلف آن در آزمایش‌ها و فرآیندهای مختلف می‌شود.
DMF در زیست‌شناسی کاربردهای متعددی دارد که به عبارتندی:
۱. سنتز و خالص سازی DNA: DMF اغلب در سنتز و تصفیه اولیگونوکلئوتیدها، که مولکول‌های کوتاه DNA یا RNA هستند، مورد استفاده قرار می‌گیرد. این محلول به حل و مخلوط کردن مواد اولیه در واکنش‌های سنتز DNA کمک می‌کند.
۲. سنتز پپتید: در فرآیند سنتز پپتید، DMF به عنوان یک محلول مورد استفاده قرار می‌گیرد تا اسیدهای آمینه را حل کند و واکنش‌های جفت شدن بین اسیدهای آمینه را برای تشکیل پپتیدها فراهم سازد.
۳. تجزیه و تحلیل پروتئین: DMF در تکنیک‌های تجزیه و تحلیل پروتئین مانند توالی‌یابی پپتید و نقشه‌برداری پپتید مورد استفاده قرار می‌گیرد. این محلول به حل شدن ودناتور کردن پروتئین‌ها برای تجزیه و تحلیل‌های بعدی کمک می‌کند.
۴. کشت سلول: DMF می‌تواند به عنوان یک جزء از محیط کشت سلولی استفاده شود، به ویژه برای کاربردهای ویژه این محلول به حل کردن برخی ترکیبات و تسهیل جا به جایی آنها به سلول‌ها کمک می‌کند.
۵. کروماتوگرافی: DMF گاهی اوقات به عنوان محلول یا جزءی از مراحل متحرک در تکنیک‌های کروماتوگرافی مانند کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا HPLC استفاده می‌شود.
۶. واکنش‌های شیمیایی: DMF می‌تواند به عنوان محلول واکنش در تعدادی از واکنش‌های شیمیایی در پژوهش‌های زیست‌شناسی استفاده شود.
نکته مهم این است که در حالیکه DMF به عنوان محلول گسترده‌ای استفاده می‌شود، باید به دقت با آن برخورد شود به دلیل خطرات پتانسیلی بهداشتی آن برای تضمین سلامتی کارکنان آزمایشگاه و صحت نتایج آزمایشی، باید اقدامات و پروتکل‌های ایمنی مناسب را در هنگام کار با DMF رعایت کرد.
نحوه آماده سازی محلول:
انیدرید استیک (≥99.5%)
DMF
محلول 2% انیدرید استیک را در DMF تهیه کنید.
Acetylation Reaction Buffer (100 µL)
| مقدار مورد نیاز | مواد واکنش هنده |
|---|---|
| 20µL | HAT reaction buffer (5×) |
| 1µL | Sodium butyrate (1 M) |
| 1µL | Dithiothreitol (DTT) (100 mM) |
| 0.5µL | 14C-Acetyl CoA (50 µCi/mL) (Perkin Elmer; 333.3 mM) |
| 1.2µL | Trichostatin A (TSA) (8.3 mM) |
| ∼20 µg | Purified recombinant HAT enzyme |
Acetylation solution
| غلظت نهایی | میزان مورد نیاز | مواد وکنش دهنده |
|---|---|---|
| 0.1M | 1.33mL | Triethanolamine |
| 0.65% | 0.175mL | 37% HCl |
| — | 100mL | RO-H2O |
| v/v) 0.375%) | 0.375mL | Acetic anhydride |
RO-H2O، آبی است که توسط اسمز معکوس (18 MΩ) خالص شده است.
1.33 میلی لیتر تری اتانول آمین و 0.175 میلی لیتر HCl غلیظ (37٪) را به 100 میلی لیتر RO-H2O اضافه کنید و مخلوط کنید تا حل شود. بلافاصله قبل از استفاده، 0.375 میلی لیتر انیدرید استیک اضافه کنید.
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
