در زیست‌شناسی مولکولی، “مخلوط aa-dUTP” به محلولی اشاره دارد که شامل ترکیبی از مولکول‌های aa-dUTP است. “aa-dUTP” مخفف “آمینوآلیل-دئوکسی‌یوریدین تری‌فسفات” است، که یک نوکلئوتید اصلاح‌شده با یک گروه آمینوآلیل به قند دی‌اکسیریبوز یوریدین متصل شده است.
گروه آمینوآلیل در aa-dUTP امکان اتصال آسان به برچسب‌ها یا رنگ‌های فلورسنتی مختلف را فراهم می‌کند. این نوکلئوتید اصلاح‌شده به‌طور معمول در روش‌های برچسب‌گذاری غیرمستقیم، مانند “روش برچسب‌گذاری غیرمستقیم aa-dUTP” استفاده می‌شود، همانند توضیحات قبلی که در قسمت دستور العمل استفاده از مخلوط aa-dNTP/Cy-dNTP Mixture (100×) | aa-dNTP/Cy-dNTP (100×) گفته شد.
در روش برچسب‌گذاری غیرمستقیم aa-dUTP، محققان نوکلئوتید aa-dUTP را در فرآیندهای تقویت مثل PCRیا ترانسکریپشن معکوس وارد DNA می‌کنند. پس از یکپارچه‌سازی aa-dUTP با DNA، DNA با برچسب آمینوآلیل‌شده به واکنش شیمیایی با رنگ فلورسنتی تحت‌گذاری می‌شود که به‌طور خاص به گروه آمینوآلیل متصل می‌شود. این فرآیند منجر به‌دست‌آوردن DNA برچسب‌گذاری‌شده می‌شود که می‌تواند برای کاربردهای مختلفی از جمله آزمایش‌های میکروآرایه، هیبریدیزاسیون فلورسنتی در محل (FISH) و سایر آزمایش‌های مبتنی بر هیبریدیزاسیون مورد استفاده قرار گیرد.
استفاده از مخلوط aa-dUTP به محققان امکان معرفی DNA برچسب‌گذاری‌شده به نمونه‌های آزمایشی خود را به‌صورت کارآمد فراهم می‌کند و انعطاف‌پذیری در انتخاب رنگ‌های فلورسنتی مختلف برای تشخیص فراهم می‌کند. این تکنیک در بسیاری از کاربردهای زیست‌شناسی مولکولی ارزشمند است، به ویژه زمانی که نیاز به برچسب‌گذاری دقیق و خاص DNA برای تجزیه و تحلیل‌های ادامه‌ای و تصویربرداری وجود دارد.
1 میلی گرم aminoalyl-dUTP را با مواد زیر حل کرده و با آب به حجم نهایی رسانده:
| غلظت نهایی | مقدار مورد نیاز | مواد تشکیل دهنده واکنش |
|---|---|---|
| 12.5 mM | 32.0 µL | dATP (100mM) |
| 12.5 mM | 32.0 µL | dGTP (100mM) |
| 12.5 mM | 32.0 µL | dCTP (100mM) |
| 5 mM | 12.7 µL | dTTP (100mM) |
| – | 19.3 µL | dH2O |
مقالات مرتبط رو حتما ببینید
نظر شما برای ما با ارزشه
0 دیدگاه
